目的 探究金丝桃苷(Hyp)对肾病综合征( nephrotic syndrome, NS)大鼠肾自噬及 AMPK/ mTOR/ ULK1 通路的影响。

方法 32 只 6 周龄 SD 大鼠分为正常组(N 组)、肾病综合征组(NS 组)、金丝桃苷组(Hyp 组, 60 mg / kg Hyp)、金丝桃苷+AMPK 抑制剂组(Hyp+CC 组,60 mg / kg Hyp+0. 2 mg / kg CC),每组 8 只。 除 N 组外,其 余各组大鼠采用一次性尾静脉注射阿霉素(6. 5 mg / kg)建立 NS 模型,模型成功率为 75. 0%。 Hyp 组大鼠灌胃给予 60 mg / kg 的 Hyp,Hyp+CC 组给予 60 mg / kg 的 Hyp 灌胃和 0. 2 mg / kg CC 腹腔注射,N 组和 NS 组给予等量溶剂,每 天 1 次,连续 14 d。 给药结束后,全自动分析仪检测 24 h 尿液总蛋白(UTP)、血尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)和白 蛋白(ALB)水平;HE 染色观察肾组织病理形态;透射电子显微镜(TEM)观察肾组织超微结构变化;Western blot 检 测肾中自噬、足细胞及 AMPK/ mTOR/ ULK1 通路蛋白表达;免疫荧光染色观察自噬体和足细胞的定位。

结果 相比于 N 组,NS 组肾小球体积变大、肾小管萎缩或部分消失、基底膜增厚;UTP、BUN、Scr、基底膜厚度、足突宽度及 p-AMPK/ AMPK 比值显著增加(P<0. 05),ALB、LC3-Ⅱ/ Ⅰ、Beclin-1、Atg5、Atg7、NPHS2 蛋白水平、NPHS2、Beclin-1 相对荧光强度及 p-AMPK/ AMPK、p-ULK1 / ULK1 比值显著降低(P<0. 05)。 相比于 NS 组,Hyp 治疗可改善肾小球 形态,降低 UTP、 BUN、 Scr、 基底膜厚度、 足突宽度及 p-AMPK/ AMPK 比值 ( P < 0. 05), 增加 ALB、 LC3-Ⅱ/ Ⅰ、 Beclin-1、Atg5、Atg7、NPHS2 蛋白水平、NPHS2、Beclin-1 相对荧光强度及 p-AMPK/ AMPK、p-ULK1 / ULK1 比值(P< 0. 05)。 相比于 Hyp 组,Hyp+CC 组肾小球体积变大、肾小管萎缩或部分消失、基底膜增厚;UTP、BUN、Scr、基底膜厚 度、足突宽度及 p-AMPK/ AMPK 比值显著增加(P<0. 05),ALB、LC3-Ⅱ/ Ⅰ、Beclin-1、Atg5、Atg7、NPHS2 蛋白水平、 NPHS2、Beclin-1 相对荧光强度及 p-AMPK/ AMPK、p-ULK1 / ULK1 比值显著降低(P<0. 05)。

结论 Hyp 可能通过 激活 AMPK/ mTOR/ ULK1 通路促进肾细胞自噬活性,减轻 NS 大鼠的足细胞损伤等肾病变。

阅读原文：金丝桃苷通过AMPK╱mTOR╱ULK1信号通路对肾病综合征大鼠自噬反应的影响.pdf