(1)复制方法 成年家兔,剪净两侧后腿足的毛,用70%乙醇消毒,上、下左、右围置冰袋(3份冰加1份结晶氯化钙,粉碎混合,温度降至-20~-25℃),冷冻1.5h,在45℃温水中复温5min(室温12℃)。观测动物一般状况、肛门体温、趾间皮温、足背周径、肢体血流量、眼球结膜微循环等变化情况,心脏抽血,测血浆黏度(HP)、血沉(ESR)、压积(HCT)、纤维蛋白原(Fb)、血栓素(TXB2)、超氧化物歧化酶(SOD)等指标。处死动物,解剖,大体观察,取心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、脑、胃、舌两侧后足背皮肌作病理形态学观察。
(2)模型特点 模型动物两侧后腿足局部冷冻后,显示精神萎靡不振,两后肢匍匐,瘫而跛行,冻后1d,后肢足背肿胀,皮肤呈紫色,出现耸毛、不活泼、蜷缩少动,反应迟钝,心跳加快,呼吸急促,冻后3~5d足背周径明显增大,多数动物足背、脚趾见有大小不等的水泡,趾间皮温升高。冻后3d血沉加快,压积、超氧化物歧化酶(SOD)下降,纤维蛋白原、血浆黏度、血栓素增加,眼球结膜毛细血管的轮廓、管壁模糊不清晰,血管的血色、血流、网交点、渗出显示异常变化,提示有血瘀形成。肢体阻抗血流图、肢体光电容积波、股动脉血流量,在冻后1~3d发生明显改变,出现血流缓慢,流量减少。光镜查见足背皮肤出血、淤血、水肿、坏死、中小细静脉弹性纤维拉直断裂,血管壁坏死,见有纤维素性和混合血栓形成,弥散分布。在肺组织中发现有出血、淤血,中小细静脉内膜增厚、内皮细胞肿胀,弹性纤维拉直断裂,红细胞聚集,见有纤维素性和混合血栓形成。少数肌性小动脉为见有血管内膜增厚,内皮细胞肿胀,有混合血栓形成。在肾、肝、脾、脑中也见有淤j衄,散在出血。电镜观察到足背皮肌细胞坏死,核和细胞器崩解,肌丝断裂,间质出血、淤血、水肿。肺泡腔出血、淤血、水肿,肺间隔上皮细胞坏死,肺泡隔毛细血管内皮坏死。以上病变以3~5d为最明显。
(3)比较医学 局部冷冻刺激后交感神经兴奋,引起反射性血管收缩,从而引起肢体微小动静脉舒缩功能障碍,局部血流减少,同时在组织冻融过程中,微小动脉收缩、毛细血管扩张收缩、动静脉短路,引起血管壁损伤,肢体局部缺血,从而出现局部受冻组织的紫绀、肿胀、出血、淤血、水肿、坏死、血栓形成,造成“脉不通,血不流”的局面。局部冻伤也引起全身反应,主要是血液流变异常,另外由于冷刺激,动物处于高度紧张及疼痛的应激状态,机体抵抗力下降。本模型绝大多数指标的改变都与经典的血瘀证临床及实验指标相符,较好地再现了血瘀证的各种特点。此外,本模型也是可逆的,一般维持1周左右即可逐渐恢复。本模型使用的寒凝方法,实质上是一种局部冻伤,这在寒冷的冬天是常见造成血瘀的原因,方法简单,符合临床病症。