1.造模材料 动物:5周龄雄性C57BL/6小鼠,体重为17~19g;药物:卡介苗, Freund佐剂(无水羊毛脂与液状石蜡按3:17比例混匀,高压消毒后分装,4℃保存);器械:离心机,研钵,琼脂糖凝胶6B。
2.造模方法
(1)肝特异性蛋白(liver-specific protein, LSP)制备:取同系C57BL/6小鼠,脱颈致死,取出肝脏,将肝组织剪碎,生理盐水反复冲洗除去血液,与等量生理盐水进行匀浆,34000r/min(10000g)离心25min,取上清液即S-100。将S-100用琼脂糖凝胶68分离,收集到的第1峰就是LSP。将LSP用生理盐水稀释至25g/L。
(2)免疫剂制备:每次免疫时将25g/L的LSP与Freund佐剂按1:1比例混匀,充分研磨至乳白色,滴加卡介苗(5mg/ml)继续研磨。
(3)免疫注射:将饲养6周的C57BL/6小鼠每周用新制备的免疫剂腹腔注射1次,每次0.2ml,共8次。
3.造模原理 异常的自身免疫反应引起自身免疫性肝炎。
4.造模后一般变化 随着实验的进行,模型小鼠变得不活跃,常显萎靡状,进食欠佳,毛稀疏干燥、粗乱蓬松,体重增加较慢。
5.造模后生化及病理变化 14周时模型小鼠血清总蛋白升高明显,清蛋白有所降低, A/G倒置明显,血清总胆红素(total bilirubin, TBIL)、ALT、AST随着免疫进程稳步上升。在免疫2次后,模型小鼠可见肝细胞灶性坏死。免疫4次后,灶性坏死增多,肝细胞肿胀、汇管区炎症细胞浸润明显。免疫6次后,肝细胞灶性坏死明显增多,可见小叶中心性坏死,肝细胞呈条索状植物细胞样改变,汇管区较明显炎症细胞浸润,肝窦内库普弗细胞明显增多,肝细胞变性、气球样变。免疫8次后,肝细胞坏死明显、呈片状,可见纤维组织增生,肝窦增宽有淤血现象。浸润细胞多为淋巴细胞,也可见单核细胞、中性粒细胞。肝组织免疫荧光检查,模型小鼠在免疫2次后即可见到呈点状、线状特异性荧光。免疫4次后,点状、线状特异性荧光增多,可见大量颗粒状荧光团,底色明亮。