目的 观察 C57BL/ 6N-Tg (1. 28HBV) / Vst 乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)转基因(HBV-Tg) 小鼠模型的特征,并分析 HBV-Tg 小鼠模型的转录组学特点。

方法 以 10 只雄性 HBV-Tg 小鼠为实验组,10 只野 生型小鼠为对照组。 以血清 HBV DNA、HBsAg、HBeAg 水平和肝组织 HBsAg、HBcAg 表达情况评价模型小鼠病毒学 特征,检测血清 ALT、AST,肝组织 HE、天狼猩红染色及肝组织 Hyp 含量评估小鼠肝脏炎症及纤维化程度。 两组各 随机选择 3 例肝组织样本提取 RNA 进行高通量转录组测序。 经 R 软件分析获得表达显著的差异基因,经 GO 和 KEGG 分析获得差异基因功能富集情况,再采用实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)对差异显著的基因进行验证。

结果 与正常组相比,模型组 ALT、AST 水平均有所升高,以 ALT 更为显著(P < 0. 05);模型组肝组织 HE 染色可见肝细胞 核增大,个别肝细胞出现肿胀。 天狼猩红染色结果显示,HBV 转基因组汇管区及小叶间出现少量胶原沉积,呈细线 状。 通过筛选条件( | logFC| > 2 倍且 P.adj < 0. 05)获得差异基因共计 1352 个,其中上调基因 703 个,下调基因 649 个。 KEGG 分析提示差异基因主要在 PPAR 信号通路、视黄醇代谢、脂肪酸降解等通路中富集(P.adj < 0. 05)。 明 显上调的差异基因主要有 Cyp4a10、Cyp4a14、Acot1、Acot3、Ehhadh 等,明显下调基因包括 Scn5a、Apol10b、Igddc4、 Cxcl1、9530077C05Rik 等,经 RT-qPCR 验证趋势一致(P < 0. 05)。

结论 HBV-Tg 小鼠具有自发纤维化的趋势,经 转录组学分析,慢性乙型病毒性肝炎(chronic hepatits B, CHB)发生的潜在机制主要涉及 PPAR 信号通路、视黄醇 代谢、脂肪酸降解、药物代谢等通路。

阅读原文：C57BL╱6N-Tg(128HBV)╱Vst乙肝病毒转基因小鼠的转录组学分析.pdf