目的 基于 ＮＬＲＰ３ ／ Ｃａｓｐａｓｅ⁃１／ ＧＳＤＭＤ 焦亡通路，建立随时间变化的脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠 模型，观察不同时间点小鼠肺损伤情况，根据不同时间伤情的变化和焦亡通路相关蛋白的表达，综合筛选出最佳造 模时间点，为后续实验奠定动物模型基础。

方法 ５４ 只 ６ ～ ８ 周龄 ＳＰＦ 级雄性 ＢＡＬＢ／ ｃ 小鼠，随机分为 ９ 组，空白 对照组（Ｃｏｎ 组）和造模时间组（１、３、６、１２、１８、２４、４８ 和 ７２ ｈ 组），分别检测体重、肺组织大体、病理观察及半定量评 分、肺指数、肺含水量及湿干重比；取肺泡灌洗液检测白细胞计数，ＴＮＦ⁃α、ＩＬ⁃６、ＩＬ⁃１β、ＩＬ⁃１８ 及 ＢＣＡ 蛋白浓度；使用 Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ 检测肺组织中经典焦亡通路相关 ＮＬＲＰ３、ｐｒｏ⁃Ｃａｓｐａｓｅ⁃１、Ｃａｓｐａｓｅ⁃１、ＧＳＤＭＤ 蛋白的表达。

结果 根据 体重统计，各组均有下降，２４ 及 ４８ ｈ 组下降最为明显；通过肺组织大体、病理观察及评分发现，２４ ～ ７２ ｈ 肺组织损 伤严重，每组与 Ｃｏｎ 组比较均有统计学意义；肺指数、肺含水量及湿干重比在 ２４ ～ ７２ ｈ 明显升高；肺泡灌洗液中白 细胞从造模后 ６ ｈ 开始升高，４８ ｈ 可达峰值，至 ７２ ｈ 均维持上升状态；灌洗液中 ＩＬ⁃１８ 在 ２４ ｈ 开始升高，７２ ｈ 仍然持 续升高；ＴＮＦ⁃α、ＩＬ⁃１β、ＩＬ⁃６ 炎症因子在 ６ ｈ 时均保持最高水平状态，在 ４８ ｈ 明显降低；灌洗液中蛋白浓度在 ２４、４８ 及 ７２ ｈ 与 Ｃｏｎ 组相比均有明显升高；通过 Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ 检测发现，ＡＬＩ 模型各个时间组焦亡通路蛋白 ＮＬＲＰ３、ｐｒｏ⁃ Ｃａｓｐａｓｅ⁃１、Ｃａｓｐａｓｅ⁃１ 与 ＧＳＤＭＤ 蛋白表达均有上调，２４ ～ ７２ ｈ 组的通路蛋白表达与 Ｃｏｎ 组相比明显增强。

结论 综合分析不同时间组中各项实验指标、炎症因子及 Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ 中通路蛋白的表达，发现焦亡机制与 ＡＬＩ 的发生与 进展密切相关，并随时间迁移。 从实验结果得知 ２４ ～ ４８ ｈ 肺损伤程度严重，肺损伤相关指标及通路蛋白具有研究 意义，可作为造模时间参考。 也为后续研究 ＡＬＩ 的具体机制及干预靶点提供了模型参考与实验基础。

阅读原文：基于ＮＬＲＰ３／Ｃａｓｐａｓｅ⁃１／ＧＳＤＭＤ焦亡通路探索小鼠急性肺损伤动态时间模型的建立.pdf