( 一 ) 采卵管和移卵管的制作

采卵管是在解剖镜下从培养皿中收集卵的工具,由外径 4mm 左右的玻璃管拉制;移卵管是向动物的输卵管中移植卵的工具,由外径1.1～1.2mm 的玻璃管拉制。采卵管的制作步骤如图5-8-11所示。

(1) 点燃酒精喷灯,将外径 4mm 左右的玻璃管置于酒精喷灯的火焰上方;

(2) 不断转动玻璃管,使玻璃管受热均匀,灼烧4～5s左右;

(3) 待灼烧玻璃管发红,轻轻用力拉长玻璃管,长度为8～9cm;

(4) 待拉长的玻璃管冷却之后,用砂轮将中间折断成两根玻璃管即可。

移卵管的制作方法与采卵管相同，但拉制完成后,其尖端需在锻烧器上或酒精灯火焰上煅烧平滑,以减少对输卵管的损伤;同时要在镜下观察,移卵管口径为 150～200µm合适。

  采卵(或移卵)时,将制好的采卵管(或移卵管)与硅胶管连接,注意连结紧密,不要漏气,即可进行操作。

( 二 ) 显微注射针的制作

1. 玻璃类型

 硼硅玻璃或铝硅玻璃材料的中空毛细管都可用于制作显微注射针。毛细管的内径 0.6～0.7mm 、外径 1.O～1.lmm为宜。这种尺寸很重要,因为它决定拉针后,显微注射针是融闭还是保持张开,若为厚玻璃,针尖常易闭合。

2. 注射针的形状

显微注射针尖端区是显微注射时最后直接进入到卵中的锥形,针身末端则是回到玻璃管原来直径的一端。其形状有三种类型,各有不同的用途。 I 型注射针针身和针尖的削度变化急速,开口直径宽,适用于发育晚期的大型前核。Ⅱ型的锥和尖都很长,直径由大向小缓慢渐变,大多数卵都用Ⅱ型针注射。Ⅱ型注射针的针尖极细,针身很长,可用于注射 2- 细胞卵或刚受精后前核很小的卵。

3. 注射针的拉制

选好的中空玻璃管通过拉针器拉制。要获得理想形态的针,优化参数需要花相当时间,但Sutter 的装置所制成的每一根针的均一性是值得花时间的(见表5-8-2 )。要达到最佳的形状,应该了解各个参数的变化的影响。一般说来,加热和拉力的增加会使针变得更细,压力降低和时间缩短,或速度提高,会使针身的锥度增加。制成理想的针形是最难掌握的技巧,牵涉到相互依存的各种参数,但这些参数对针形的影响并不是等同的。

4. 斜切中空毛细管显微注射针

显微注射针拉好后,一种使针尖锋利的方法是在持定针上将注射的针尖折断口虽然这种制作方法速度快;但所得到的针尖不像在磨针器上制作的那样具可重复性。但是,只要熟练,任一种方法都容易制出锐利的针尖,足以穿透透明带和前核的膜而不致使卵裂解或损伤。若要得到斜口的针,在磨针器上用 0.5～5pm 粒度的钻石轮来磨针是一种重复性很好且可制出锐利的针的方法。研磨时用光纤照明和配上宽视野目镜的立体显微镜,可以很好地观测针尖的斜角。

针尖一经斜切好后,必要时,显微注射针可作 150～300 弯曲(图 5-8-12)。制作这种奇曲仍需在锻烧器上进行(图 5-8-13)。

( 三 ) 持卵管的制作

制作持卵管的材料与显微注射针相同,并按拉制显微注射针的方法首先拉制成型,然后煅烧器下按如下步骤操作。

(1) 打开缎烧器电源,聚集加热丝,使加热丝在镜下 (10 ×)清楚可见,并位于视野下方。 

(2) 将事先在拉针器上拉制的中空毛细管,用玻璃刀在其颈部 2cm 处切断。然后,固定在移动支架上,将尖端部移向加热丝,在同一视野下清楚可见。

(3) 打开脚踏开关,调节温度 200 ℃,使加热丝变红,推进支架使中空玻璃管的前端距加热丝约 10µm 处,利用加热丝的高温,使管的管口受热变形,管口变小呈钝缘,根据测微尺测定口径大小,内径应为 12～15µm。这样,持卵管做成。如下图所示。