图3-1  转基因质粒载体结构示意图(箭头表示内切酶位置)

在转基因显微注射实验中，最常见的是质粒。由于质粒克隆容量的限制，克隆入质粒表达载体的转基因通常为cDNA或小的基因组DNA序列。构建质粒载体时，将克隆的eDNA置于启动子的下游(图3-1)。为正确表达相应的蛋白质，cDNA前必须包含一个翻译起始密码子(ATG)和一个上游的核糖体识别通用序列[G/N-C/N-C/N-ANNAUGG]，这一序列称为Kozak序列，为核糖体识别mRNA翻译起始位点。如，真核表达载体设计时需在起始密码子ATG前加上GCCACC形成核心序列 GCCACCATG。在cDNA末端还需要一个阅读框翻译终止密码子(UGA、UAG、UAA)来终止翻译。在启动子和cDNA之间加入一个小的内含子可使转基因的表达水平明显提高。可剪切的内含子使 mRNA分子恰当有效地成熟。为了避免载体骨架序列影响转基因表达，通常用内切酶将转基因和其前后的表达控制序列从载体中切出，纯化后用于显微注射。