在抗癌药物临床前药效学实验中体内抗肿瘤药效评价必不可少的,常规使用的都是用裸鼠建立的人肿瘤细胞异种移植模型。虽然裸鼠移植模型已经成为一个金标准,但该方法实验周期长、实验操作复杂,不适合进行大量候选化合物的抗肿瘤药效评价,而且有很多人的肿瘤细胞移植到裸鼠上之后很难成瘤。斑马鱼在早期没有自体免疫,肿瘤异种移植的成功率高,加上实验周期短——给药3天即可观察药效,因此,现在斑马鱼肿瘤异种移植模型已经越来越多的被用于候选药物的早期体内抗肿瘤药效评价。
斑马鱼品系:野生型AB品系。
适用范围:化学药、生物药、天然混合提取物、中药提取物、纳米药物。
建立斑马鱼肿瘤异种移植模型:收集培养好的人肿瘤细胞,用特异性荧光染料标记,标记完成后,通过显微注射将细胞注射到麻醉后的斑马鱼卵黄囊中间靠近背侧的位置,可以根据细胞的生长特性调整细胞注射量。注射完毕后,在荧光显微镜下观察,将注射不成功或死亡的斑马鱼移除。洗脱麻醉液后将斑马鱼转入35℃生化培养箱进行培养。
环特现在已经建立了40多种斑马鱼肿瘤异种移植模型,包括正常肿瘤细胞株、多药耐药肿瘤细胞株和特殊基因高表达的肿瘤细胞株等,评价指标有:1. 肿瘤大小(定量分析);2. 肿瘤转移;3. 肿瘤引起的血管增生;4.存活率; 5. 存活天数。
结果观察和分析:药物处理结束后,将斑马鱼用三卡因甲磺酸(MS-222,MESAB)麻醉后,在荧光显微镜下观察斑马鱼体内肿瘤大小、肿瘤转移情况并拍照。通过图像处理软件计算斑马鱼体内肿瘤荧光强度,用荧光强度作为评价肿瘤大小的指标,定量评价药物的抗肿瘤效果。
图6. 药物对斑马鱼体内Hela细胞增殖和转移的抑制作用.图中所示为药物处理后的斑马鱼,红色亮点为荧光标记的Hela细胞,黄色椭圆形所示位置为肿瘤细胞初始注射位置.
相关癌症药物筛选与评价模型还有抗血管形成模型、凋亡促进剂模型、P-gp抑制剂筛选模型、抗肿瘤多药耐药性筛选模型、靶向抗癌药物筛选模型(VEGF,EGFR,Wnt,ALK,mTOR,B-RAF……)、癌性中性粒细胞减少症模型、癌性贫血模型等。
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