通常选成年豚鼠。受试物组不少于20只、对照组不少于10只。应设立阴性对照组和阳性对照组。推荐的阳性对照物有巯基苯并噻唑,苯佐卡因,二硝基氯苯,331环氧树脂等,也可以使用其他的阳性对照物,但轻-中度的致敏剂在加佐剂的试验中至少30%和不加佐剂试验中至少15%应有反应。
取决于所选择的方法。在Buehler试验中,致敏剂量应当足够高,以产生轻微的刺激性,激发剂量为不产生刺激性的最高剂量。在GPMT试验中,致敏剂量应足够高以产生轻-中度的皮肤刺激性且能很好地全身耐受,激发剂量为不产生刺激性的最高剂量。第0,6~8和13~15天局部给药诱导,第27~28天在未给药部位给药6小时激发。GMPT试验采用皮内注射给药,使用或者不使用佐剂进行诱导,局部诱导5~8天后,第20~22天给予激发剂量24小时,在去除激发剂量24和48小时后读取结果。两种试验方法均在去除药物24和48小时后读取结果。如结果难以判定,一周后再次激发。
一般在致敏后1和24小时及激发后24和48小时观察皮肤红斑、水肿和其他异常反应,按表12进行评分,计算过敏反应发生率。按表13判断过敏反应强度。可根据毒性反映情况适当调整观察时间。同时测定开始和结束时的动物体重。
表 皮肤反应评分标准
皮肤反应强度 | 积分 |
(1)红斑形成 |
|
无红斑 | 0 |
轻微可见红斑 | 1 |
中度红斑 | 2 |
重度红斑 | 3 |
水肿性红斑 | 4 |
(2)水肿形成 |
|
无水肿 | 0 |
轻度水肿 | 1 |
中度水肿 | 2 |
重度水肿 | 3 |
总积分 | 7 |
表 致敏强度
致敏率 | 分级 | 致敏强度 |
0~8 | Ⅰ | 弱致敏 |
9~28 | Ⅱ | 轻度致敏 |
29~64 | Ⅲ | 中度致敏 |
65~80 | Ⅳ | 强致敏 |
81~100 | Ⅴ | 极强致敏 |