【造模机制】甲苯二异氰酸甲酯(toluene diisocyanate,TDI)属于低分子量化学物质,对机体只有半抗原特性。TDI在高浓度情况下具有明显的黏膜刺激及腐蚀作用,当动物接触1.5ppm的 TDI一个月或数月,可引起动物的支气管炎。经证明TDI哮喘是IgE介导的速发型变态反应。
【造模方法】抗原制备用即刻制备的TDI/1,4-二氧六环液于冰浴下磁力搅拌器上逐滴加于1%牛血清清蛋白(bovine serum albumin,BSA)碳酸氢钠中,调节该液pH为8.5。1小时后将该反应液移入透析袋,置通风橱中过夜,使二氧六环挥发,随后在pH 7.4的磷酸盐缓冲液(PBS)中彻底透析6次,紫外分光光度计245nm处测吸收峰。用制备成的抗原加卡介苗、弗氏不完全佐剂混合、乳钵研磨成油包水乳剂备用。
动物免疫选用白色短毛豚鼠,体重250~300g。分别用0.5ml甲苯二异氰酸甲酯牛血清清蛋白结合抗原(TDI-BSA)/弗氏完全佐剂(CFA)及TDI-BSA/氢氧化铝(AHG)给动物腹腔内注射。免疫动物于3周后再加强免疫1~2次。抗原吸入激发实验初次免疫5~8周后进行,抗原吸入激发试验,先给以单纯人血清清蛋白(human serum albumin,HSA)激发,无反应后再吸入TDI-HSA。雾化吸入浓度为1mg/ml的TDI-HSA后有30.8%的动物出现明显哮喘反应。
【模型特点】经TDI-HSA激发后,动物呼吸频率增快,呼吸幅度增大,哮喘发作时伴咳嗽、躁动不安,甚至痉挛性呼吸。87.5%的TDI-BSA/CFA致敏动物以及40%的TDI-BSA/AHG致敏动物可同时出现不同滴度的抗原特异性IgE及IgG型抗体。
【模型评估和应用】TDI是重要的职业性致喘物之一。TDI作业者中约有5%~10%的人可发生职业性哮喘。此模型的建立为进一步探讨TDI哮喘的免疫学机制提供了条件,可用于TDI引起的职业性哮喘发生、发展及其药物防治的研究。