【造模机制】邻苯二甲酸酐(phthalic anhydride, PA)是小分子化合物,属半抗原物质。半抗原不能刺激机体产生免疫反应,需与蛋白结合成全抗原后才能发挥致敏作用。据此本实验制备了两种不同载体的苯酐全抗原即PA-HSA和PA-BSA。实验用动物用PA-BSA致敏,而激发时选择吸入HSA,无哮喘出现,证明BSA和HSA两者无交叉免疫反应。但吸入PA-HSA后出现了哮喘发作,说明PA与载体蛋白结合后具备了全抗原的特征而使机体致敏。用致敏的抗血清给正常动物注射使其被动致敏,并在相应抗原吸入攻击下同样可诱发出哮喘。
【造模方法】抗原制备选用豚鼠,体重250~300g,2~3月龄。30mg PA用1ml丙酮溶解后,加入4℃ 2%的人血清清蛋白碳酸氢钠(9%)溶液中,并在此温度下搅拌1小时形成苯酐-人血清清蛋白结合物(PA-HSA)。同法制备苯酐-牛血清清蛋白结合物(PA-BSA)。
免疫注射将制备好的抗原与弗氏完全佐剂等量研磨或用两支注射器对推,使之成油包水状(佐剂包抗原)混合物备用。固定动物,每只于腹腔或后腿肌内注射0.2~0.3ml(含蛋白4~6mg),只使用 PA-BSA弗氏完全佐剂注射。于注射3~8周后进行抗原吸入激发试验。
抗原吸入激发及记录方法使动物俯卧固定,以胶布环绕贴于胸部并以细线与传感器及记录仪连接。激发前先描记正常的呼吸运动曲线。用1:100 HSA生理盐水溶液雾化后使动物吸入1~3分钟,观察记录30分钟。
【模型特点】豚鼠吸入抗原后在1~10分钟内,动物一般表现为呼吸频率加快,由发作前的100~120次/min增加到140~160次/min;呼吸幅度亦增大,同时可伴有咳嗽、喷嚏,重者呼吸极度费力、挣扎,可有短暂窒息甚至死亡,发作一般持续30~50分钟。
【模型评估和应用】PA是重要的化工原料,也是一种职业性致喘物质。PA导致的哮喘属变应性哮喘,患者体内可测出特异性抗体,PA抗原吸入激发试验常呈现阳性。本模型的建立,为进一步研究该病的病理变化提供了条件,同时可用于PA引起的职业性哮喘发生、发展及其防治的研究。