在微生物学和免疫学实际工作中,常常需用到动物的血液和血清,兔血和羊血是制备血琼脂平板的必需成份,豚鼠血清则是补体的主要来源,而且免疫动物后,要从动物体内获得特异性抗体,也需要对动物进行采血。为了防止血清脂类的干扰,采血一般是在清晨空腹时进行。另外为了防止溶血,所用采血用具均必须彻底干燥。
1. 小鼠、大鼠的取血法:
1)断头取血:这是常用的一种简便取血法。用于需要较大量的血液而又不需保存动物生命的实验中。操作者左手抓取动物,使其头略向下倾,右手持剪刀剪掉头部,立即将其颈部向下,提起动物并对准已准备好的容器(内放抗凝剂)使鼠血快速滴入容器内。此法小鼠可采血0.8~1.0 mL,大鼠可采血5~8 mL。
2)眶动脉或眶静脉取血:此法既能采取较大量的血液,又可避免断头取血中因组织的混入而导致的溶血现象。操作时将动物倒持压迫眼球,使其突出充血后,用止血钳迅速摘除眼球,眼眶内很快即流出血液,将血滴入加有抗凝剂的玻璃器皿内至不流为止。此法由于取血过程中动物未死,心脏不断跳动,取血量较断头法多,一般可取得相当于动物体重4%~5%的血液量。用毕动物即死亡,故只适用于一次性取血。
3)眼眶后静脉丛取血:如需要中等量的血液而又要避免动物死亡时可采用此法。取内径为1.0~1.5 mm的玻璃毛细管,临用前折断成1~1.5cm长的毛细管段,浸入1%肝素溶液中,干燥后用。取血时左手抓住鼠两耳之间的颈背部皮肤以固定头部,轻轻向下压迫颈部两侧,引起头部静脉血液回流困难使眼眶静脉丛充血,右手持毛细管,将其新折断端插入眼睑与眼球之间后再轻轻向眼底部方向移动,旋转毛细管以切开静脉丛,保持毛细管水平位,血液即流出,接收入事先准备的容器中。取血后,应立即拔出取血管,放松左手即可止血。小鼠、大鼠、豚鼠及家兔均可采取此法取血。刺入深度小鼠为2~3 mm,可采血0.2~0.3 mL;大鼠为4~5 mm,可采血0.4~0.6 mL。实验中可根据需要,于数分钟内在同一部位反复取血。
4)尾尖取血:此法适用于采取小量血样。取血前宜先通过适当方法使鼠尾血管充血,然后剪去尾尖,血即自尾尖流出。
5)心脏取血:将动物仰卧固定在固定板上,左手食指在左侧第3~4肋间摸到心博处,右手持注射器,于心尖搏动最明显处刺入心室,血液由于心脏跳动的力量自动进入注射器。 也可从上腹部刺入,穿过横膈膜刺入心室取血。此法要求操作者动作迅速、轻巧,针刺部位准确,抽吸时要缓慢而稳定,否则,较大的真空会使心脏塌陷。或因暴力作用造成动物取血后死亡。如第一次没刺准,应抽出针头重刺。
2、家兔的取血法:
1)耳静脉采血法:用手指轻弹家兔耳朵,使其充血,并用二甲苯及乙醇涂擦使耳静脉扩张隆起,以手指压住耳静脉根部。用针头刺入静脉抽血,或以刀切开边缘静脉,即有血液流出,以无菌小试管收集滴出的血液。
2)心脏采血法:将动物固定后,剪去左前胸部之毛,在第三与第四肋骨之间,找到心脏跳动最强的部位。经碘酒和乙醇消毒后,将无菌注射器从心脏跳动最强部位刺入,如感觉针头阻力消失,或感觉针尖搏动时,稍抽注射器活塞,血液即可流出。如针头没有穿进心脏,则稍抽出针头或将针头改变方向再进行穿刺。
3)颈动脉放血法:将家兔仰卧固定,剪去颈部之毛,用乙醚进行全身麻醉,采血局部用碘酒与乙醇消毒。沿颈正中线切开颈部皮肤,切口长约5~6 cm,将皮肤与皮下组织剥离,找出颈动脉。以钝玻棒细心地将迷走神经与颈动脉分离。将颈动脉上部结扎,下端用止血钳夹住,将颈动脉剪断,并将下部断端对准锥形瓶瓶口,放松止血钳,则血液喷于瓶中。
3、豚鼠采血法
1)耳缘剪口采血:将耳消毒后,用锐器(刀或刀片)割破耳缘,在切口边缘涂抹20%柠檬酸钠溶液,阻止血凝,则血可自切口自动流出,进入盛器。操作时,使耳充血效果较好。此法能采血0.5 mL左右。
2)心脏采血:取血前应探明心脏搏动最强部位,通常在胸骨左缘的正中,选心跳最明显的部位作穿刺。针头宜稍细长些,以免发生手术后穿刺孔出血,其操作手法详见兔心脏采血。因豚鼠身体较小,一般可不必将动物固定在解剖台上,而可由助手握住前后肢进行采血即可。成年豚鼠每周采血应不超过10 mL为宜。
3)股动脉采血:将动脉仰位固定在手术台上,剪去腹股沟区的毛,麻醉后,局部用碘酒消毒。切开长约2~3 cm的皮肤,使股动脉暴露及分离。然后,用镊子提起股动脉,远端结扎,近端用止血钳夹住,在动脉中央剪一小孔,用无菌玻璃小导管或聚乙烯、聚四氟乙烯管插入,放开止血钳,血液即导管口流出。一次可采血10~20 mL。
4)背中足静脉取血:助手固定动物,将其右或左右膝关节伸直提到术者面前。术者将动物脚背面用乙醇消毒,找出背中足静脉后,以左手的拇指和食指拉住豚鼠的趾端,右手拿的注射针刺入静脉。拔针后立即出血,呈半球状隆起。采血后,用纱布或脱脂棉压迫止血。反复采血时,两后肢交替使用。
4.鸡翼静脉采血法:将鸡侧卧固定,掀开一翼,在翼下可见一条较粗的静脉,经消毒后,采血者左手压迫静脉向心端,使血管隆起,右手持注射器刺入静脉取血。