实验动物腹部常用外科手术

来源:《基础动物实验技术与方法》 发布时间:2016年09月26日 浏览次数: 【字体: 收藏 打印文章

一、手术制备腹部外科常见疾病动物模型

1.肠梗阻模型

可选择各种动物,常用以下方法。

单纯结扎肠管法:用细丝线贯穿单纯结扎肠管24h后,即可见梗阻部位以上的肠管明显扩张。早期为肠管积气,稍后有肠液积滞,并可见到肠内压和肠管蠕动的改变。为了控制实验条件,可根据实验目的结扎相应部位。如果要观察高位肠梗阻的变化。可结扎十二指肠横断或在距屈氏韧带10cm结扎;若观察药物对低位肠梗阻的影响,则可以回盲部为界,在回肠末段进行结扎。除了单处结扎外,也可选5~10cm长的一段肠管,在其两端结扎以造成闭袢性肠梗阻。

结扎肠系膜上动脉法:0号丝线在肠系膜上动脉于腹主动脉起始部位双重结扎即可。观察梗阻肠段的扩张、充气、积液、肠壁充血、水肿的情况,观察肠坏死、出血、穿孔、腹膜炎的发生以及动物的死亡率、死亡时间等。还可以观察到肠管的运动、吸收、分泌以及血运的变化。

肠扭转:在直视下将某段肠袢以及其肠系膜的正常解剖位置为0点,在被扭转的肠袢的上下两端,分别为黑白线作为标记,用手法做顺(逆)时针3600的扭转而造成。

2.肠粘连模型

可选择各种动物,术前禁食8~12h,进行无菌操作。

自幽门而下,找出十二指肠,将小肠每隔1cm用有齿镊夹伤肠管约0.5cm长,以局部渗血为度,连夹3~4处。将肠管送回腹腔,逐层缝合腹壁,术后分笼饲养。术后禁食1d,自由饮水,第2天按常规喂养。通常术后1周为粘连形成期,损伤肠管局部有明显的充血水肿。在肠襻与大网膜、肠襻与肝脏之间逐渐形成粘连,但粘连程度比较轻,容易分离。第2~3周为机化前期,此时充血、水肿消退,粘连较为显著。第4周以后,充血及水肿消退,粘连数量有所减少,但粘连较前更为牢固。

3.阻塞性黄疸模型

实验动物选用家兔,体重2.0~3.0kg,单笼饲养一周。动物术前禁食12h,常规备皮。无菌条件下取上腹部正中切口,逐层切开。暴露肝、胃及十二指肠,在十二指肠起始部,可见肝十二指肠韧带内有一条较宽的黄色透明管道,即为胆总管。仔细剥离胆总管,在其下方穿1号丝线,双重结扎,逐层关腹。在术后4~5d动物即出现阻塞性黄疸的典型变化。

4.实验性门脉高压

以狗为例,可选用以下方法。

肝前方法:用肝前术式制作门脉高压模型,只能做门静脉干的不完全结扎,再做动静脉吻合,令某一动脉血流注入门静脉,以增加肝血流量。因为狗对门静脉一次完全阻断耐受力较差,多在阻断后12h内死亡。在门静脉入肝分叉稍下方使用聚乙烯或衬有塑料垫的金属环圈。环圈直径以能将门静脉口径缩小至原来的1/4为度,从而使静脉壁逐渐硬化缩窄,直至完全阻塞。术后2周行探察术,如门静脉尚未完全阻塞,此时可将门静脉干结扎。经过2周的适应,即使门静脉血流完全阻断,狗也能耐受而不至于死亡。此法可使门静脉压明显增高,但常在20~30d后恢复正常。其恢复的机制在于侧支循环的建立和开放。

肝内方法:可直接向门静脉内注入二氧化硅悬液(配制方法为二氧化硅1.5~2g混入血浆30ml);或通过胃管将四氯化碳3~5ml注入胃内,每周2次,持续半年。此种方法形成的单纯肝硬化,仅能造成腹水而不会出现较明显的门脉高压。必须在肝硬化形成后,再在肝静脉下游结扎下腔静脉,才能制成门脉高压的模型。

肝后方法:结扎肝静脉或肝静脉汇入腔静脉处以下的下腔静脉,可造成肝脏充血及腹水。单独使用此法,仅能产生暂时性门脉高压。

联合方法:以上各种方法,单独使用都不能造成满意且持久的门脉高压模型,常须采用两种方法联合使用,为了产生食管静脉曲张,还须再结扎除贲门胃底部以外的胃部静脉。

5.急性胰腺炎模型

肠液逆流法导致兔急性胰腺炎模型:选用健康家兔。取上腹正中切口。暴露十二指肠。兔主胰管开口于十二指肠的升部,管壁很薄、透明。再靠近十二指肠处将主胰管以0号线结扎,在近胰腺端再穿一线,以备注射后结扎用。然后用5ml注射器自十二指肠内抽取肠液3~5ml,快速注射胰管内,须确认针头在胰管内,使肠液能进入胰组织内。拔出针头时,立即将胰管靠近胰腺端结扎。以免注射肠液漏出,逐层缝合腹壁。术后1d即可诱发明显的出血坏死性胰腺炎。动物表现食量减退,血清淀粉酶即将升高,持续1周左右,胰腺出现明显充血、水肿,并有出血点。

胰管结扎法导致兔急性胰腺炎模型:手术方法同前,在找到主胰管后,用0号线贯穿并双重结扎,关闭腹腔。喂以高蛋白、高脂肪食物,或注射促胰液素,使胰液分泌增加,诱发一过性的急性水肿性胰腺炎,如果结扎胰管的同时,暂时阻断胰动脉或动脉内注射有活性的胰蛋白酶,可导致出血坏死性胰腺炎。

二、腹部脏器切除术

1.阑尾切除术

以兔为例说明手术过程。

取右腹经腹直肌切口,长约8cm,逐层切开皮肤、皮下组织,切开腹直肌前鞘,钝性分离腹直肌。显露后鞘和腹膜。充分结扎止血后,术者和助手用血管钳提起后鞘和腹膜,交替钳夹,确认未夹住腹内脏器和组织后,切开后鞘和腹膜。用纱布垫保护手术切口。兔的盲肠较粗、较长,位于右中腹,直径3~4cm长约40cm,壁较薄,有明显的盲肠袋,呈灰褐色。从回盲部开始,沿盲肠向远端寻找,可见一突然变细的盲管,色较红润,远端为盲端,长10~15cm,即为兔的阑尾,一般位于右中上腹。兔的阑尾系膜与人的有所不同,薄而窄,与结肠为一共同系膜。兔的结肠较细,有明显的纵形结肠带,壁较厚,与阑尾易于鉴别。将阑尾用阑尾钳或卵圆钳提出腹腔外面,从系膜的远端开始,分段钳夹,切断至阑尾根部,近心端单纯结扎后再贯穿结扎一次。因阑尾系膜内有阑尾动静脉,一定要牢固结扎,以防止术后结扎线脱落造成腹腔内大出血。在距阑尾根部周围0.5cm的盲管壁上用1号丝线做浆肌层荷包缝合线,暂不结扎。用湿纱布保护好阑尾周围组织,以免切除阑尾时污染腹腔。距离阑尾根部0.3~0.5cm处,先用直血管钳轻轻钳夹阑尾后,用4号线在钳夹部予以结扎,结扎线要牢固以防止脱落,并用一血管钳紧靠线结扎处夹住阑尾结扎线,提起阑尾根部,剪去多余的线,在结扎线远端0.3~0.5cm处,用血管钳钳夹阑尾,在结扎线与血管钳间切除阑尾,阑尾残端依次用石炭酸、75%乙醇和生理盐水棉球涂擦后,将阑尾残端向荷包缝线内推进,收紧荷包缝线,将阑尾残端埋入盲肠壁内,可在外面再行浆肌层“8”字缝合加强之。检查腹腔无活动性出血,器械敷料清点无误后关腹。

2.脾脏部分切除术

选用羊或犬作为实验动物。做上腹正中切口或左上腹经腹直肌切口,长8~10cm,逐层切开进入腹腔,结扎止血,用纱布垫保护手术切口。解剖学研究证实,脾脏具有按血液供给而划分的脾实质单元,每一单元由一根小动脉供应血液,因此,可以进行脾脏部分切除。选定拟切除的部分脾脏后,在尽量靠近脾脏侧结扎,并切断通入该部分的一根或几根脾动脉分支。接受此动脉供血的脾实质部分,即因血供被阻断而颜色出现苍白。以拇指、食指捏挤苍白部分与正常脾组织交界处,即可将两部分分离,形成仅有脾脏被膜的无实质区,用1把无损伤钳夹,两旁再各夹1把,然后撤去中间1钳,在2钳之间切断脾脏,切除此部分脾脏。以无损伤缝合针00号肠线连续缝合保留部分的断端,撤去钳夹。用生理盐水清洗腹腔,常规关腹。

3.肠切除端端吻合术

可选用猪、羊、犬等作为试验动物。

将麻醉的动物仰卧位固定在手术台上,腹部去毛。常规消毒铺单。做上腹部经腹直肌切口,长约15cm,逐层切开进入腹腔,结扎止血,用纱布垫保护手术切口。供应病变部位的肠系膜及血管呈扇形分布,将系膜及血管分别用止血钳夹住后切断、结扎。在欲切断肠管处并排上2把大直血管钳,对系膜缘应较系膜缘多切一些,使切断线与肠的纵轴呈450~600角,以增大吻合口口径和保证良好的血液供应。在2把血管钳间切断肠管,在切断线健侧断端5cm处各上肠钳1把,以阻断肠内容物的逸出,去掉血管钳。将切除端肠腔内容物用苯扎溴铵棉球拭净,完成肠管切除。将肠管两断端靠拢,先在距肠管切缘0.5cm处的肠系膜侧及对侧,用0号丝线各缝一固定线并做牵引用。然后用0号丝线缝合吻合口后壁内层,缝针由一侧肠腔内向肠壁外穿出,从另一侧肠壁外向肠腔内穿入,收紧缝线并打结,使线结打在肠腔内,并保留线尾,暂不剪断。用带针的缝线做吻合口后壁内侧连续锁边缝合,边距、针距均为0.3~0.5cm,直到吻合口的另一端。注意每缝一针后,助手应将缝线拉紧。连续锁边缝合到对侧时,缝针由肠腔内经肠壁向外穿出,接着行前壁内层连续全层内翻缝合,缝合时,浆膜面多缝些,黏膜面少缝些,拉紧缝线后使黏膜不外翻,浆膜对浆膜,以保证吻合口愈合良好。缝合到最后一针,将该线与吻合口后壁的线尾打结于肠腔内。去除肠钳,以0号丝线在吻合口前后壁各做一排浆肌层间断缝合,吻合口的系膜侧和对系膜侧缝合要紧密,必要时应加强1~2针,因为此部位是吻合口瘘的好发部位。以拇指和食指检查吻合口大小,以拇指能够顺利通过为度。将肠系膜裂孔用0号丝线间断缝合,封闭裂孔。缝合时注意勿伤及肠系膜上的血管。用生理盐水清洗腹腔,在吻合口附近放置橡皮引流管。检查腹腔无活动性出血,清点器械敷料,无误后关腹。

三、腹部脏器移植

动物移植模型的实验研究是开展临床患者脏器移植的前提和基础,在研究移植排斥反应发生机制、免疫抑制治疗、免疫耐受、器官保存、缺血再灌注损伤以及探索新的手术方式等方面也具有临床移植难以取代的优越性。因此,世界很多移植中心已经将实验动物的移植模型作为移植研究的常规手段。实验性移植是任何开展临床移植的单位必不可少的阶段。

1.猪小肠移植术

选择体重20~30kg健康幼猪,雌雄不限。术前24h内禁食,可自由饮水。受体猪手术前3d还应进行肠道清洁灌肠、口服抗生素等肠道准备,并从其他猪采取全血1000ml备用。供、受体剃去术野毛发或以硫化钠脱毛。供、受体均须专人负责术中管理,术前30min肌内注射阿托品0.025mg/kg,戊巴比妥或氯胺酮(0.5mg/kg)肌内注射使动物安静后,迅速穿刺静脉,建立2路以上输液通道,监测血压。在硫喷妥钠及氯琥珀胆碱的诱导下,自主呼吸状态时随其吸气做气管内插管,呼吸机人工继续呼吸。也可不做气管内插管,以0.25%硫喷妥钠术中静滴维持麻醉。

(1)原位全小肠移植模型

供体手术:①将动物仰卧位固定于手术台上,常规消毒,铺单,术中补液1500ml,同时应用先锋霉素1.0g和0.5%甲硝唑100ml;②做腹部正中切口,长约20cm,逐层切开充分暴露腹腔;③解剖游离出肠系膜上动脉、门静脉及腹主动脉,切除肠系膜血管周围的淋巴结;④给予肝素5000U达到全身肝素化,由腹主动脉远端向近心端插管。迅速灌注4℃肝素乳酸林格液,离断门静脉,使灌注液从离断的门静脉流出,灌注高度为80cm;⑤灌注至肠管及系膜呈均匀苍白色,静脉流出液清澈时,即可终止。将全部空回肠、门静脉、肠系膜上动脉连同一段腹主动脉整块切取;⑥以0.5%甲硝唑100~200ml灌洗肠腔后,保存于4℃乳酸林格液或平衡盐溶液中。阻断动静脉后去除导管,修整血管吻合口。

受体手术:①切口同前,拉钩牵引暴露。术中补液2500m1,术中抗生素应用同供体手术。②切除受体的空回肠,将近端空肠和末端回肠各保留5cm左右,用以与供体做肠吻合用。解剖游离出胰腺下缘的肠系膜上动、静脉,断端部位距胰腺下缘3cm左右,用以做血管吻合用。③以4℃生理盐水囊保持供肠低温状态,根据受体血管情况进行供肠血管休整。以6-0或7-0无创缝线连续外翻对端吻合肠系膜上动、静脉。恢复移植肠管血供,供肠迅速呈红色,并恢复蠕动。④供体近段空肠与受体近段空肠侧端吻合,近端空肠10~20cm做外置空肠造口,以备手术后活检用,供受体末端回肠端端吻合。固定移植肠管防止扭曲成角,关闭系膜裂隙,确保血管吻合口无张力,胃造口以备术后给药及灌食,常规关腹。⑤术后管理。术后3~5d内禁食,须给予完全胃肠外营养,术后第4~6d逐渐恢复饮食。注意补充足够的水和电解质溶液,肌内注射或静脉滴注抗生素。⑥免疫治疗。手术前1d始及手术后均须实施免疫抑制治疗,多采用环孢素A联合硫唑嘌呤和皮质激素的方法。

(2)节段性小肠移植模型

供体手术:①解剖游离出肠系膜上动脉、静脉主干终末段及其所支配的回肠,切除肠管所属肠系膜血管周围的淋巴结。在结肠动脉远端切断肠系膜上动、静脉。②给予肝素5000U达到全身肝素化,结扎由移植段小肠肠系膜动脉近端,向远端插入导管,妥善固定,切断相应的肠系膜静脉,迅速灌注4℃肝素乳酸林格液,灌注高度为80cm,使灌注液从离断的肠系膜静脉流出。③灌注至肠管及系膜呈均匀苍白色,静脉流出液清澈时,即可终止,一般约需消耗灌注液500ml。④以4℃ 0.5%甲硝唑100~200ml灌洗肠腔后,保存于4℃乳酸林格液或平衡盐溶液中待移植。阻断动静脉后去除导管,修整血管吻合口。⑤节段性小肠移植可以2只动物互为供受体,剩余小肠行端端吻合恢复肠道连续性。

受体手术:①解剖游离出肠系膜上动脉、静脉主干终末段。以4℃生理盐水囊保持供肠低温状态。以6-0或7-0无创缝线连续外翻对端吻合肠系膜上动、静脉。恢复移植肠管血供,供肠迅速呈红色,并恢复蠕动。②移植小肠近远端分别做腹壁造口。固定移植肠管系膜,防止扭曲成角,关闭系膜裂隙,确保血管吻合口无张力,关闭系膜裂隙。③术后管理。术后3~5d内禁食,输液1500~2000ml/d,应用抗生素。术后第4~6d逐渐恢复常规饮食。手术后第7天,如果移植小肠黏膜色泽正常,手术成功。免疫治疗方法同原位全小肠移植。

2.犬肾脏移植术

选择体重10~15kg健康杂种犬,雌雄不限,选配性别相同者做为供、受体。该模型的手术过程与临床肾移植类似,常用于练习手术操作。术前12~14h内禁食,可自由饮水,剃去术野皮肤毛发。术前30min肌内注射阿托品0.5mg,可选用乙醚吸入麻醉或氯胺酮静脉复合麻醉,供、受体均须专人负责术中管理,穿刺静脉建立2路以上输液通道,监测血压,可不做气管内插管和人工呼吸。

供体手术:选择右肾作为供肾,采用右肋缘下切口,逐层切开进入腹腔。温盐水纱布将胃、肠管、肝等器官隔开手术区。切开后腹膜,显露肾脏及肾周围脂肪囊。切除肾脂肪囊,游离肾脏,注意保护肾门及输尿管周围脂肪组织。以1%普鲁卡因2ml做肾蒂封闭,防止肾血管痉挛,自肾门处游离肾动静脉,游离近侧输尿管8~10cm。切取供肾要待受体犬髂窝部解剖完成后进行。静脉快速滴注20%甘露醇200ml,同时补充足量的晶体液,确保供肾血供,并处于良好的泌尿状态。静脉注入含肝素5000U生理盐水达到全身肝素化,在肾动脉根部以套管针向肾门方向置管,靠腹主动脉夹阻断肾动脉,靠下腔静脉阻断肾静脉并切断,同时经肾动脉插管灌注4℃肝素乳酸林格液,灌注高度为80cm,直至肾静脉流出液清澈,肾脏变为苍白为止。切断。肾动脉及输尿管,将肾脏浸入4℃乳酸林格液或其他保存液中,结扎供肾动静脉及输尿管断端,逐层关腹。

受体手术:采用下腹部正中切口,逐层切开进入腹腔。温盐水纱布将胃、肠管、肝等推向左侧。暴露右侧髂动静脉,剪开后腹膜,游离出右侧髂动静脉2~3cm。以无创血管钳分别阻断拟吻合处的髂静脉上、下两侧,在其前壁做一与肾静脉口径相当的梭形切口,以6-0的无创缝线做肾静脉与髂静脉的连续端侧吻合;以同样的方法,用5-0的无创缝线做肾动脉与髂动脉间的连续端侧吻合。血管吻合口可在表面涂少量ZT胶,以封闭吻合口缝隙,并起到营养血管的作用。先静脉、后动脉开放血流,可清晰见到肾动脉搏动明显,移植肾由苍白转变为红色,输尿管有尿液流出,在后腹膜固定肾脏。在受体膀胱的输尿管汇入部上方做一切口,将供肾输尿管断端与膀胱以5-0的无创缝线做端侧吻合。用37℃抗生素生理盐水冲洗,使受体腹腔迅速复温,根据实验目的的需要,切除受体犬的双侧肾脏。检查无活动性出血后逐层关腹。术后早期肾脏功能代偿不全,常表现为多尿。术后2~3d内必须及时补充水和电解质,以防止水电解质酸碱失衡。异体肾移植须使用免疫抑制剂。

3.肝移植术

肝移植动物模型应该根据实验目的的不同,选择不同的实验动物。大动物主要用于探讨手术方式,练习手术技巧,如犬、猪、猴等;而大鼠和小鼠等小动物主要用于移植免疫的研究。

(1)犬原位肝移植模型:犬个体较小,由2名手术人员即可完成手术,术前、术后管理比较简单。但犬的肝脏对缺血较敏感,操作比较复杂,术后长期生存率低,多适用于急性实验。经典原位肝移植术由Starzl首先使用并发展成熟,其特点是受体建立门-腔分流和体外转流,以缓解无肝期内脏和腔静脉的淤血。

术前准备:供受体均为健康成年犬,供受体体重要匹配。术前12h禁食,对受体犬还应做肠道准备,可从其他犬采血1000~2000ml,常规备皮。麻醉及术中管理须专人负责。

供肝切取:①供犬手术前冰浴降温至25℃~30℃。做上腹部大“十”字切口,逐层切开充分暴露腹腔。②切断肝周韧带游离肝脏,注意尽量在肝侧保留韧带,以便移植时固定肝脏。③游离下腔静脉至右肾静脉下方,以盐水纱布将右肝叶轻翻向左侧,结扎切断右肾上腺静脉,游离腹主动脉至肠系膜上动脉水平,结扎切断腹主动脉的该段所有分支。将胃和脾脏牵向右侧,暴露出腹腔动脉,并游离到三分叉处,结扎、切断胃左动脉、脾动脉。④靠十二指肠处游离并双重结扎胆管,切断肝总动脉的分支胃右动脉和胃十二指肠动脉。游离门静脉,结扎并切断胃左静脉、胃右静脉、幽门静脉,注意结扎其外膜的淋巴管。在汇入门静脉处双重结扎并切断胰静脉,以获得足够长的门静脉与供受体门静脉吻合用。结扎肠系膜上动脉。⑤在尽可能远处结扎门静脉。于门静脉近端插管,用4℃肝素乳酸林格液或UW液1000ml按标准重力法灌洗肝脏,灌注的高度为80cm,灌洗的同时从腹主动脉远端插管,收集放出来的血液以备受体手术中输注,灌洗完毕后,肝脏中心温度下降至10℃~20℃,在插管处横断门静脉。⑥在腹腔动脉起始处近端约2cm处至肠系膜上动脉起始部位横断腹主动脉。显露肝上间隙后靠根部结扎切断两侧膈静脉,分别在靠膈肌和右。肾脏平面切断肝上、肝下下腔静脉,切取供肝,并迅速移入4℃保存液中,进行必要的修整。⑦在将要行吻合处将胆囊剪一小口,4℃肝素乳酸林格液灌洗胆管,洗出所有的胆汁。

受体肝脏切除:①采用上腹部“屋顶”状切口,以自动牵开器牵开肋弓,显露肝脏。②在肠系膜上动脉上方游离出2cm左右的腹主动脉。切断肝门左侧的肝胃韧带,在尽可能靠近十二指肠处双重结扎并切断胆总管和胃十二指肠动脉。游离门静脉直至左右分叉处,注意结扎其外膜的淋巴管。建立门静脉与下腔静脉分流,口径8~10mm。③建立体外静脉转流系统。将左侧股静脉和颈外静脉通过聚乙烯管相连,经过转流泵使肝下腔静脉、门静脉血流经颈外静脉转流至心脏。游离结扎肝动脉,同时迅速用Satinsky钳分别阻断肝下腔静脉、门静脉、肝上下腔静脉,紧贴肝表面切断周围韧带,游离结扎两侧膈静脉。贴近肝脏剪断上述血管移出受体肝脏,原位植入供肝。

供肝植入:①据供肝血管口径及长度适当修整受体各血管,以5-0 Prolene线或尼

龙线连续外翻端端吻合肝上下腔静脉,为了操作方便,肝上下腔静脉吻合时应先在其左右两角牵引各缝一吊线,然后在管腔内连续缝合后壁,再在血管外缝合前壁。以6-0 Prolene线或尼龙线连续外翻端端吻合门静脉,肝上下腔静脉和门静脉吻合完毕后立即开放门静脉血流。等从肝下下腔静脉流出约50ml血液后开放肝上下腔静脉。再关闭肝下下腔静脉,5-0 Prolene线或尼龙线连续外翻肝下下腔静脉端端吻合,静脉吻合完毕后6-0 Prolene线或尼龙线关闭门腔分流口,停止静脉转流。②用6-0 Prolene线或尼龙线进行供体肝动脉-腹主动脉蒂与受体腹主动脉端侧吻合。③胆道重建可以选用胆囊或胆管十二指肠吻合术、胆管端端吻合术、胆囊空肠吻合术、胆管空肠吻合术或胆管插管外引流术。④用37℃抗生素生理盐水冲洗,使受体腹腔迅速复温,缝合肝周韧带,妥善固定肝脏,防止肝脏移位所致的血管成角扭曲。置腹腔引流管,彻底止血清洗后逐层关腹。

常见并发症:①排斥反应;②体外转流并发症,如:转流管内血栓形成、肺栓塞;③血管阻断时间过长所致的并发症,如出血性胃肠炎、胃肠道瘀斑等;④其他并发症,如:手术技术失误、胆道并发症、感染等。

术后管理:术后保留胃管直至受体犬不能忍受。麻醉清醒后即可拔除气管插管。常规抗感染治疗,术后8~10h输血500ml,术后3d内每天须按100ml/kg经静脉补充10%葡萄糖液,术后第四天始可逐步恢复饮食,每日检测肝功能。为了防治排斥反应,使用免疫抑止剂。

(2)猪背驮式原位全肝移植模型:背驮式原位全肝移植(PBOLT)是近年来受到重视的一种手术。与经典的肝脏移植手术比较,具有无须静脉转流,对受体血流动力学干扰小等优点。猪肝移植模型具有以下特点:猪肝脏解剖与人类似,移植手术与人类肝移植术相似,麻醉管理较简单,常用于肝移植手术技巧的练习。猪不同的个体间组织相容性较好,在不同免疫抑制剂条件下全肝移植后能长期生存,但是移植术后感染发生率高,长期管理较困难。

术前准备:选用2~3个月的良种幼猪,体重在20~30kg,选配性别相同、体重匹配者做为供、受体。术前12~14h内禁食,可自由饮水。受体猪还应做肠道准备,无须使用免疫抑制剂。剃去术野皮肤毛发。另外还须准备成年猪作为供血组。

麻醉:供体组和受体组同时进行,术前30min肌内注射阿托品0.5mg,2组均先用氯胺酮15mg/kg肌内注射进行诱导麻醉。做气管内插管辅助呼吸,并用静脉复合麻醉维持。迅速穿刺耳部静脉或切开前肢静脉建立2路以上输液通道。因术中将阻断下腔静脉,注意避免切开下肢血管。选择颈外动脉或前肢动脉插管,监测平均动脉压(MAP)。切开右颈静脉,插管接三通输液器,以便输血、输液并测量中心静脉压(CVP)。

供肝切取:①动物仰卧位固定,常规消毒铺巾后做腹部大“十”字切口,逐层切开进入腹腔。②依次游离腹主动脉、肠系膜上静脉和下腔静脉,解剖肝十二指肠韧带,在肝门部显露胆总管、肝动脉和门静脉。逐一结扎各细小血管分支,显露胆总管时勿过多游离,以免影响血运。在显露肠系膜上静脉和门静脉时须切除部分胰腺。注意缝扎止血。③切开肠系膜上静脉前壁并向上插管至肝门部门静脉内,4℃肝素乳酸林格液或其他液体进行原位重力冷灌注,灌注的高度为80cm。再切开腹主动脉向上插管至腹腔动脉水平,于膈下将腹主动脉关闭,4℃肝素乳酸林格液或其他液体进行原位重力冷灌注,灌注量分别为1000ml和5000ml。在灌注开始的同时剪开膈肌并切断肝上下腔静脉。④在将行吻合处将胆囊剪一小口,用肝素乳酸林格液进行胆道灌洗,洗出所有的胆汁,待灌注完毕肝脏降温变色后切下肝脏。各胆道保留足够长度。⑤将肝脏置于4℃肝素乳酸林格液中进行修剪,去除多余组织并进行注水实验确认无管道漏水。

受体肝脏切除术:①应与供体肝同时进行。常规消毒铺巾后取腹部“人”字切口,逐层切开进入腹腔。②切断肝周韧带,游离第1、2肝门,将胆总管、肝动脉、门静脉和下腔静脉分别游离。③猪肝脏解剖可分为3叶,其下腔静脉内段为右肝叶所紧密包裹,仅有一层内膜衬覆于其中,切除右肝叶和游离显露下腔静脉很困难,处理第2、3肝门时易造成大出血,可以紧贴下腔静脉自下而上逐步结扎后切除肝脏,采用“蚕食法”处理第2肝门并清除残留肝组织,将下腔静脉显露足够的长度供移植时用。靠近肝脏切除胆总管、肝动脉、门静脉。

受体移植手术:①将供肝上下腔静脉断端修剪成450角的斜面,与受体肝上下腔静脉以5-0缝线端侧连续外翻缝合,2血管夹角约300。②供受体门静脉以6-0缝线端端连续外翻缝合,开放门静脉,从肝下腔静脉放血1000ml后夹闭该静脉,并恢复门静脉及肝上下腔静脉血流,肝脏颜色逐渐变红润。③以6-0缝线端端连续外翻缝合肝动脉,恢复肝动脉血流后肝脏颜色恢复正常红色。④以5-0缝线端端连续缝合胆总管,可用T形管从吻合口上方引出作为支架,也可行胆总管置管外引流术。⑤用37℃生理盐水冲洗腹腔。检查各吻合口无渗血、渗液,将肝脏周围各韧带及膈肌与相应部位缝合固定,注意防止下腔静脉受压和血管扭曲。⑥将胆道引流管引出腹腔,置腹腔引流管,彻底止血,逐层关腹。

术后管理:术后12~14h常需要以呼吸机维持通气功能,可使用少量肌松药物,防止躁动,给予适量镇静药以维持动物处于安静状态,呼吸循环状态稳定后可拔除气管插管。术后24h进流食,并逐渐恢复饮食,连续补液3~5d,常规监测肝功能。术后无须使用免疫抑制剂。

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