摘要：背景：阉割手术被广泛用于公犬的绝育。但是实施手术的时间、动物的恢复和手术成本等对该技术有显著的影响。以前的研究显示睾丸内注射氯化钙（CaCl2）生理盐水是替代手术一个很有前途的方法。然而，在剂量足够低避免副作用的情况下，不能保持长时间的无精症。该研究是优化配方，调查睾丸注射氯化钙-利多卡因或氯化钙-乙醇溶液对长效绝育的效果。氯化钙-20%利多卡因溶液或氯化钙-乙醇经睾丸注射到两组犬中（21只/组）。治疗后的动物在2，6，12个月时检查精子产量，血液中的睾丸激素水平和副作用；在注射前和注射后12时检查睾丸大小和精液量。对照组只接受注射生理盐水。将实验组与对照组比较。

 

结果：实验组动物睾丸尺寸明显减少。75%的接受氯化钙-利多卡因处理的犬绝育效果长达12个月。然而，氯化钙-乙醇处理组出现最佳的长期避孕效果，导致无精子症超过12个月。氯化钙处理后，睾酮水平明显降低和性活动消失。虽然，氯化钙-利多卡因处理组，12个月时睾酮恢复到基线水平。氯化钙-乙醇处理组睾酮水平下降63.6%。整个研究过程中，保持较低的生理范围。没有出现副作用。

 

结论：本研究18-28公斤公犬，单、双侧睾丸内注射20%氯化钙-95%乙醇是诱导绝育的可靠方法。该方法表现出长期有效性和减少性行为

这种化学方法提供一种有效的方法替代手术阉割法，对动物福利有积极影响。

 

 

方法：动物：52条健康，混合品种的雄性犬，龄为2至6岁（平均3.5岁），体重28至18公斤（平均= 22.9公斤）。通过常规血液检查和临床检查证实健康状况良好。为评估犬的生育，在研究开始前进行检查（包括物理检查及超声检查和精液质量评价）。当暴露于发情的母犬时，每只犬都表现出性欲。犬被正常接种疫苗，群居饲养，定期室外活动，室内温度15-26度，湿度30-70%。

 

实验操作：在第0天（T0），使用随机数字表三组将动物随机分为：实验组（A和B 各21只）和对照组（C 10只）。采集血液样本和进行精液评价。犬肌肉注射（IM）乙酰丙嗪马来酸盐注射液5-10mg/10kg。用游标卡尺测量睾丸的宽度。根据阴囊宽度，将正确剂量注入每个睾丸。A组犬注射含有氯化钙-1%利多卡因盐酸盐溶液。B组犬注射CaCl2-乙醇溶液。C组的犬注射盐水溶液。在2，6，12个月（T1，T2和T3），分别进行精液评价，采集血液样本进行睾酮评价。在12个月（T3），测定睾丸宽度。在整个试验中，犬处于临床观察。

 

睾丸注射CaCl2溶液的制备：制备含20%氯化钙和1%利多卡因溶液，20克氯化钙水合物粉末被添加到定容为100ml 1%利多卡因盐酸盐溶液混合，过滤消毒。20%氯化钙无水乙醇溶液的制备：20克氯化钙水合物粉末被添加到定容为100毫升的95%乙醇混合，过滤消毒。

 

犬接到一单、双侧睾丸内注射溶液剂量跟睾丸宽度成比例：直径19-22毫米宽阴囊动物收到0.8毫升注射液，而直径大于23毫米宽的阴囊动物接受1毫升注射液。

 

精液量、精子总数和运动性：使用塑性锥由数字操纵阴茎收集精液到无菌管中，保存在37度。三组均对射精量进行测量， 30-60分钟内由计算机辅助精子分析检查精液，通过大范围的精子计数进行验证。并获得总精子数和活力。结果通过光学显微镜评价证实。

 

血清睾酮测定：在时间T0，T3确定睾酮水平，犬皮下注射（SC）1000IU人绒毛膜促性腺激素（HCG）。在注射hCG后120分钟，收集血液，通过化学发光技术测定睾酮。

 

常规的临床观察：从T0到T3所有的动物都保持常规的临床观察。化学灭菌程序后，第一个72小时进行连续观察，其次是长达15天每日观察，其次是根据研究需求观察。临床观察评估的参数包括生理数据（呼吸、流涎、体重、食欲、体温、等），触诊，姿势、发声、精神状态（顺从等）。表示疼痛或不适的行为，性行为和攻击行为（咆哮、撕咬）进行仔细的评估。

 

睾丸宽度测量：阴囊宽度为睾丸大小。在T0、T3，实验室使用卡尺测量睾丸右侧和左侧宽度（mm）。数据表示左、右睾丸之间的平均宽度。

 

结果：常规的临床观察：实验组止繁殖剂或控制组生理盐水注射前，犬的平均体重为22.8±2.9kg。在试验过程中，没有观察到体重的变化。所有的犬，血液学和临床化学值始终保持在参考范围内。研究中的所有动物耐受氯化钙的睾丸内注射。在大多数犬的研究中，疼痛参数没有显著差异。然而几只犬，阴囊穿刺注射时表现出轻微的疼痛症状，2%的犬在注射CaCl2-乙醇，CaCl2-利多卡因溶液或生理盐水时有腹部肌肉收缩，1%犬出现嘶叫。轻微的短暂性不适可能是由针穿刺阴囊或睾丸囊液压力引起的。阴囊超声（USG）显示睾丸内低回声的区域对应于注入液体处。即使进行仔细注射，在几只犬仍发生渗漏。立即用干纱布擦拭溶液，并没有出现渗漏后的不良影响。氯化钙注射后的头两个星期期间，评价参数的变化A、B组和对照组（C组）的犬没有经历任何骚动，发热，或明显的睾丸或炎性肿胀。两周内没有发现不良的副作用。然而，注射后24小时和第3-4天之后开始，在A、B和控制组犬睾丸触诊硬度略有增加。A组犬硬度增加的更明显。对性行为的干扰（即，性欲减退和支配行为的损失）和A和B治疗后观察到侵略性。对照组无睾丸改变或行为改变。

 

总精子数、精子活力和精液量：在T0，平均总精子计数（x 10  6）A组为346.2±33.9，B组为348.4±32.4和对照组为335.9±34.9。方差分析显示随时间变化精子数组间差异显著，进一步分析显示是由于处理组动物精子数减少，而对照组动物没有明显变化。注射生理盐水对照组，发现在T1、T2和T3时精子总数没有显著的变化。在基线T0时，A和B组的总精子数没有不同于对照组。同对照组相比，在T1-T3时实验组总精子数显著降低。在A组和B组，在T1和T2时所有的犬都是无精子。在T3时，A组17条（81%）犬无精子症，4条犬（19%）有严重少精子症，只有5%精子有活力表现。在T3，A组犬平均总精子计数为7.7±16.4。在T3，所有B组犬无精子。据统计分析，睾丸注射CaCl2后A组和B组观察到的总精子数显著减少。

 

在T0时，A组精子活力90%，B组95%，而对照组80%。对照组在所有次测试（T1-T3）精子活力为80%。氯化钙处理的42只犬，仅四条注射CaCl2-利多卡因的犬有5%的精子活力。在T0各组射精量并没有显著变化。CaCl2处理组比对照C组在T3有较低的精液量。从T0到T3，A组和B组精液量显著降低。

 

血清睾酮测定：在T0，睾丸激素水平的平均值（ng/dl）分别为A组456.2±132.4，B组454.6±159.9和对照组721.2±176.2。对所有的犬进行了测试，在整个研究过程中睾酮值保持在生理范围内（100-1000ng/dl），虽然睾丸单边注射CaCl2足以显著降低治疗犬血浆睾酮浓度。分析显示：氯化钙处理组比对照组有较低的睾酮浓度。对照组血清睾酮水平的变化无统计学意义。在氯化钙-利多卡因注射液（A组），前6个月睾酮明显下降，在T3时回到基线水平。氯化钙-乙醇治疗组12个月睾酮水平下降了63.6%。在12个月的随访期间B组睾酮水平明显下降并维持在正常生理范围的低端。

 

睾丸宽度测量：睾丸的宽度也随着组别和时间而变化。对照组睾丸的宽度随着时间的推移无显着差异。T0和T3（VS），睾丸宽度的平均值（mm）分别为A组 24.7±1.5 vs 12.8±1，B组 24.8±1.5 vs 12.2±0.9和对照组24.9±2.1 vs 24.9± 2.1. 治疗后，A组和B组阴囊宽度显著下降小于对照组。在T3，A组和B组睾丸宽度平均减少约50%。

 

讨论：乙醇是导致睾丸硬化的一种化学物质。大鼠睾丸内注射无水乙醇研究表明其降低睾酮水平同手术去势效果相当。CaCl2-乙醇溶液的研究表明更有疗效，痛苦小和减少外周炎症。

 

结论： 20% CaCl2-乙醇单、双侧睾丸内注射所有的犬在一年内无精子，代表公犬绝育的最佳方法，而氯化钙-利多卡因溶液无精子症只持续了六个月。在CaCl2-乙醇绝育方法较基线水平导致持久降低睾酮浓度，并减少性行为，成为很好替代手术去势方法。