猪的肝脏解剖结构及生理代谢方面接近于人类,是理想的肝移植基础研究模型。为了提高成功率,减少并发症,猪原位肝移植的手术步骤应尽量简单,手术时间也应尽可能缩短以减轻手术创伤和出血等因素对动物全身所造成的干扰。小型猪肝移植模型能直接客观地模拟临床肝移植中热缺血、冷保存、复温及再灌注损伤的整个过程,是研究人类肝移植的理想动物模型。
动物术前24小时禁食,12小时禁水。供体选用基础麻醉,速眠新、阿托品及氯胺酮肌注,戊巴比妥钠维持麻醉。受体在此基础麻醉后,气管插管,采用维库溴铵、氯胺酮及安定维持麻醉状态,全术程保温。
1.供体手术 在腹部行大“十”字切口,进腹后游离肝周韧带,解剖分离出胆总管、肝动脉及门静脉。经脾静脉插入灌注管至门静脉主干,腹主动脉分叉处上方插入腹主动脉灌注管。全身肝素化,经门静脉及腹主动脉重力灌注4℃乳酸林格液及4℃ UW(the University of Wisconsin solution)液(用于保存供体器官的一种保存液),在灌注过程中应不断敷冰屑在肝脏表面以助肝脏降温,经胆总管断端插管冲洗胆道直至流出液清澈无血,等肝脏冷却至表面呈均匀黄白色后,离断肝周血管,切取供肝,置4℃ UW液中修整。修剪肝上及肝下下腔静脉,切除胆囊,清除门静脉及肝动脉周围结缔组织及淋巴结,胆总管不作过多游离,游离肝动脉至腹腔动脉开口处。各管道修整完毕后需注水法检查,妥善结扎或缝合修补漏液处。修整完毕后,将供肝置4℃ UW液中保存。此供肝无热缺血,冷保存时间控制为4小时。
2.受体手术 上腹行反“L”形切口,入腹游离肝周韧带及血管,离断肝动脉,以静脉阻断钳分别阻断门静脉、肝上及肝下下腔静脉,紧贴肝脏离断门静脉、肝上及肝下下腔静脉,移除受体肝脏,妥善修整各血管断端。将供肝置入受体动物腹腔,行连续缝合吻合肝上下腔静脉,吻合门静脉,恢复肝脏血流。连续缝合吻合肝下下腔静脉,开放下腔静脉血流。吻合肝上下腔静脉过程中经门静脉持续滴注4℃乳酸林格液以避免供肝植入时升温并驱出供肝内富含高钾的UW液。采用供体、受体肝总动脉对端吻合重建肝动脉。胆总管以可吸收缝线间断对端吻合,清洗腹腔后关腹。
3.术中监护处理 无肝前期需测血气及血生化,确保数值在正常范围。于无肝期之前适当加快输液速度,使中心静脉压(CVP)提高至正常上限水平,一般需补充乳酸林格液约200ml。无肝期需严密监测门、腔静脉阻断后血流动力学变化,预防回心血量骤降所致的急剧低血压、心律失常及心跳骤停。依靠血管活性药物并配合适量输液,将动脉收缩压维持在6.66kPa以上。在新肝期,肝脏血流一开放即输入5%碳酸氢钠以纠正酸中毒,静脉推注10%葡萄糖酸钙对抗高钾,输少量新鲜全血补充失血,扩容,改善凝血功能,继续静脉点滴多巴胺收缩血管,维持血压及有效循环,保护肾脏。术后需持续监测心率、动脉血压及中心静脉压24小时,静脉输液80~100ml/kg,静脉滴注青霉素480万U,48小时后开始进食,停止输液。
小型猪对非转流下的门、腔静脉同时阻断的耐受时间不宜超过30分钟,一旦超过30分钟,将影响动物存活。必须在有限时间和较紧急的病理生理状态下快速、高质量完成肝上下腔静脉及门静脉吻合以尽快结束无肝期。术后小型猪的存活率均较高,无肝期和手术时间均控制在规定时间之内,因此,对肝脏的损伤降到最低,肝功能检测指标数值有一过性的改变,最终变为正常,说明小型猪肝移植模型制作较成功。但肝移植术后也会出现一些急性排斥反应的现象。