突变系实验动物

来源:《实验动物屏障环境与设施管理技术》 发布时间:2016年12月06日 浏览次数: 【字体: 收藏 打印文章

一、突变系动物的基本概念

基因突变是指染色体上一个位点内的遗传物质的变化,或者说是DNA分子上长链中碱基对的改变,也称点突变(point mutation)。简言之,所谓基因突变,就是一个基因变为它的等位基因。根据突变对表现型的最明显效应,可分为:①可见突变(visible mutation):突变的效应可在生物的表现型上看出来,即用肉眼就能观察出来,如若干大体形成的变异。②生化突变(biocthemical mutation):突变的效应导致一个特定的生化功能的丧失。肉眼是无法予以鉴别的,一定要借助于某些特殊方法来检测。③致死突变(lethal mutation):致死突变可分为显性致死和隐性致死。显性致死在杂合态即有致死效应,而隐性致命突变较为常见,如镰形红细胞贫血症的基因就是隐性致命突变。④条件致命突变(conditional lethal mutation):在某些条件下是有成活的,而在另一些条件下是致命的。从孟德尔的实验观察,要知道一个基因存在,通常只能靠这个位点的不同等位基因所产生的表现型改变,才能知道哪一基因决定哪一性状。带有这种突变基因的小鼠称为突变株(mutant stock),相同突变株的动物即为某一突变品系动物。动物发生基因突变后就会导致相应的正常生理功能丧失,我们称为病理缺陷,而且这种病理缺陷可以稳定地代代相传。对于小鼠,目前已知的有300个基因,在小鼠各染色体上均已定位,有的多,有的少,基因经过突变方能找到它的位置。

二、常用的突变品系

(一)肌萎缩症(dystrophia muscularis,dy)小鼠

该鼠也称肌失营养症即后肢瘫痪小鼠,与人类有相似的肌萎缩症状,其dy/dy约出生2周可见后肢拖地,表现有进行性肌衰弱和广泛性的肌萎缩。病鼠出生时是活的,但只有少数病鼠能存活10周以上,无繁殖力。但已证明dy/dy雌鼠的卵巢移植到正常雌鼠体内是具有生殖能力的。由于雌本基本不育,因交配无能且母性不好,一般应留杂合型,如雄鼠与正常雌本交配有困难,可人工授精,也可卵巢移植。常用的有REJ129/dy后肢偏瘫小鼠。

(二)肥胖症(Obese,Ob)鼠

肥胖症鼠有肥胖小鼠(obese mice)和肥胖大鼠(obese rat)。肥胖小鼠体重可达60g,这种小鼠无生育力,表现为单纯胖而不伴有糖尿病。纯合体约在4周龄时即可识别出,此时其增重加速,很快可达到正常同窝鼠体重的3倍。中等程度的摄食过度可使其几乎不太活动,但在幼年时其血糖和免疫活性胰岛素并不明显增加,5~6月龄以后肥胖趋向稳定,胰岛素和葡萄糖水平上升,这些小鼠不受外来胰岛素的影响,但节制食物可增加对胰岛素的敏感性以及延长其寿命。所有的雌鼠均无生殖力。卵巢和子宫萎缩,若坚持节制饮食,则雄鼠偶尔能够繁殖。Langerhans岛的增生与胰岛素分泌增加有关,肾小球发生肾结节状脂肪玻璃样病变,在电镜下可见其局限于肾小球膜和基膜的内皮面。肥胖小鼠的皮下、后腹膜和性腺的脂肪增多,这是脂肪细胞数目增多和体积增加的结果,因此被称为肥大性-增生性肥胖症。

这种小鼠的肥胖症与人类的肥胖症很相似。利用这种小鼠曾进行了许多有益于肥胖症的生化、病理、激素及药物治疗等的研究。因为这种鼠无生育力,所以必须用杂合子交配以保持此基因。

Ob/+和+/+很难区别,表现完全一样,用其交配要花费很长时间才能辨别。这种突变小鼠的维持很困难。若节制饮食使体重下降,则其维持种系的效果不好,亦可从肥胖鼠的卵巢取卵子移植于+/+鼠进行繁殖。

(三)侏儒症(dwarf mice,dw)鼠或称矮小畸形鼠

这种畸形又称垂体性侏儒症(pituitary dwarfism),因为其缺乏脑下垂体前叶的生长素和促甲状腺激素,故使生长发育障碍。纯合子dw/dw小鼠在12-13月龄时即可被识别,它表现为短尾和短鼻,到成熟年龄时,其体积约为同窝正常鼠的1/4,8周龄时体重为8~10g,尽管多数能存活到成熟期,但雄鼠和雌鼠均无生殖力,可出现继发的黏液性水肿。

给病鼠食入垂体前叶碎片可以使其生长速度基本正常。

由于该鼠无生育能力,两性均不育,所以只能用杂合子把基因保留下来,这样只能得到25%的矮小畸形鼠,9月鼠龄时将正常垂体移植到这种鼠的肾脏,在雄鼠可长大到近于正常小鼠体形并可繁殖(但在雌鼠收不到效果,原因不明),繁殖结果如下:

 

这种突变型小鼠在内分泌研究上有较大用处,如对“生长素”等进行分析研究等。

(四)糖尿病(diabetes,db)鼠

由Hummel等(1966)最先报道,它是由单隐性突变基因引起,自发于Jackson实验室的近交系小鼠(C57BL/Ks),该基因(db)与肥胖(ob)不是等位基因,尽管它们的表现型特征相似,db/db基因鼠的第一个表现是当病鼠到3~4周龄时,腋和腹股沟皮下组织出现脂肪的异常沉积,此时血糖升高,从200mg/100ml血以下的正常水平上升到1岁龄时的682mg/100ml血(平均为563.2mg/100ml血)。雌鼠无生殖力,但其卵巢移植到其他鼠后仍能恢复生殖活性。多数鼠不能存在到8个月以上,但若在疾病早期节制饮食则可延长其生命。

临床症状包括肥胖、高血糖、糖尿、蛋白尿、烦渴、多尿,最后可因酮尿而死亡。死后变化包括胰岛细胞中具有很少B颗粒和胰管肿胀。Like(1972)捕述了db/db小鼠肾小球的变化,在外形上与同龄正常小鼠的一样,但比后者大得多,小鼠到了糖尿病发病年龄时,肾小球膜变化更加明显,外周基层持续增厚,并生有许多小结,还认为多尿可能是高血糖对肾小球产生利尿作用的结果。

(五)骨骼硬化症(osteopetrosis,op)鼠

发生于侏儒症(dwarf)小鼠。这个隐性基因(op)位于第12号染色体上。大约10日龄时(op/op)即可识别出,其头呈网顶状,脚短,门齿阙如,主要的骨骼缺陷是骨重建不良造成的,在出生前后6周最明显。随着小鼠的成长,骨形成减速,重建时骨的消除与形成的速度几乎相等,因此症状表现比较轻微,病鼠的破骨细胞较同窝正常鼠为小,酸性磷酸酶出现于整个细胞,而不是仅集中在破骨细胞和骨头的界面上。op/op小鼠的长骨受到的影响最大,至少在出生后的6个月里,骨髓腔闭合,出现原始的海绵骨,病鼠的骨片似乎比同窝正常鼠密实,当病鼠到6~10月龄时骨髓腔重新出现,并充满正常的造血成分,其中巨核细胞的数目增多。与其他骨硬化突变体不同,它们不伴随色素异常,因此不同于小眼畸形(microphthalmia)mi/mi和灰色-致死(grey-lethal)gl/gl小鼠。op/op突变体生存的时间较长,骨骼的病变可随小鼠的成长而消失,在骨骼病变消除前,骨基质形成和甲状腺滤泡旁细胞水平的比率大幅度下降。由于病鼠骨质生长异常,骨质硬,骨髓腔消失,所有骨骼都硬化,并伴有无齿症,因此往往在同窝仔鼠中发现死亡仔鼠。第二窝才出现断奶后死亡的小鼠无牙齿,系因不能吃食而死亡,但于断奶后喂软饲料可保留下来。op为隐性基因,无齿型发生于肥胖型父母,第二代出现无齿。正常时上、下颌骨有牙齿的主要发点,骨硬化症时有生长牙齿的生发点,但因骨质硬而不能长出。这种鼠的病变与人类大理石骨病相似。

(六)显性斑点(dominant spotting)突变贫血鼠

因为斑的大小是指白斑(white spotting)大小,所以缩写为W,正常时是小写WW,当呈WW时则表现出贫血。在W处有5个等位基因,任何两个等位基因都可引起严重的大红细胞性、发育不全性贫血,同时引起肝脏造血功能障碍。贫血的严重性受环境和基因型影响。可出现不同类型的突变体,如W/+,Wv/+,Wv/Wv,W/Wv,W/WJ,WJ,WN等。这些突变体均无生育力,表现为黑眼,白色。

(七)白内障(cataract,Cat)突变鼠

这是显性遗传,10月龄至14周龄时晶状体浑浊,还会发生晶状体液化和核的上超咬合。当Cat呈杂合状态时出现白内障。这种性状在一般情况下很容易观察到,可作为眼科的动物模型。

(八)无脾(asplenia,As)突变鼠

该鼠脾脏完全阙如,它作为一个遗传性疾病出现于显性半肢畸形的杂合子小鼠。这些小鼠已被广泛应用于脾脏功能的研究,也是研究中医中药的重要动物模型,还是研究血吸虫病的良好实验材料。

(九)灰色致死(grey-lethal,GI)突变鼠

gl/gl突变鼠除显纯灰色外,很主要的性状是生长障碍,出生14天后即比正常为小。牙不萌出,形态不正常,牙齿不钙化。肢体长骨不正常。一般死于22~30日龄,利用其骨骼系统的障碍,有人用作锶的代谢研究。

(十)视网膜退化(retinal degeneration,rd)突变鼠

此种病鼠与人类的色素性视网膜炎相似,人类的色素性视网膜炎也是一种遗传病,呈现进行性视网膜硬化,有色素沉着及视网膜血管闭锁萎缩。人类这种病例很难取得标本进行病理等研究,而动物模型则提供了极为理想的实验材料,还可进行其他一系列研究。

(十一)淡化致死基因(dilte-lethal,aL)突变鼠

淡化致死基因突变鼠除淡化的性状外,还有惊厥、瘫痪,大约死于生后3周。后来有人发现这种病的苯丙氨酸氢氧酶的活性大大下降,因此此模型类似人类的苯丙酮尿症。

(十二)针尾(pintail,Pt)突变鼠

当Pt+杂合状态就呈现显性突变性状,见削短与卷曲的尾巴,且椎间盘逐龄产生快速退化,这就类似人类的椎间盘突出症,可用于这方面研究。

(十三)少趾症(hypodactyly,Hd)突变鼠

该鼠两前肢有足趾各2个,两后肢有足趾各4个。雄鼠少趾症同时出现精子缺乏(oligospermia)。雌鼠生育力正常。少趾与精子缺乏相关共存是一个有兴趣的现象。裸鼠亦有类似情况。无毛时生育力低下,其中关系尚未搞清。可能与多型性(pleomorphic)基因或伴性(sex-linkage)基因相关。只见于小鼠和大鼠,原因不明。

(十四)高血压突变型大鼠(hypertension rat)

高血压大鼠生育力强,对寿命也明显影响,可养13~14个月,Okamoto培育了许多亚系,以SHR最为名贵。SHR(spontaneously hypertensive rats)即自发性高血压大鼠,是由Okamoto和Aoki选育成功的。正常大鼠收缩压110~120mmHg,开始用♂145~175mmHg×♀130~140mmHg作为亲代,以后兄妹交配。育成的高血压大鼠出生后5周血压可达150mmHg,而成年雄鼠的血压达200mmHg,其特点是高血压自发率为100%,血压平均170~180mmHg,最高达200mmHg,并有高血压心血管病变。繁殖时每代都要选血压高的动物(高于180mmHg)作为繁殖鼠种。

(十五)癫痫突变型大鼠(audiogenic seizures,声源癫痫发作)

用铃响声刺激会旋转起舞数秒钟,然后一侧倒地发作癫痫,与人类癫痫相似。可用此种鼠做动物模型来研究人类癫痫病。

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