在动物研究中佐剂的使用需谨慎考虑。相对非特异性的炎症可促进抗免疫，研究者需要评估实验中研究动物相关的系统性疼痛和痛苦。强效的抗炎药物的使用，特别是弗氏完全佐剂（CFA），可导致严重的副作用。尽管预期可使用弗氏完全佐剂的可替代物，CFA的使用对诱导目前还没有替代品存在的自身免疫疾病模型是科学合理的。与科学目标一致时，产生常规的抗体，已知产生不太强烈的炎症反应的佐剂应被视为CFA的替代物。这些可能包括目前佐剂如铝化合物（如明矾），角鲨烯水乳液（MF59和AS03），单磷酸脂质A（MPL），Ribi 佐剂，含明矾（型）；在临床前开发佐剂（如montanides），聚合物微粒（例如，皂甙Quil AQS-21，物，iscomatrix），免疫刺激核酸；其他Toll样受体激动剂（如鞭毛蛋白，），阳离子脂质体制剂（CAF）结合免疫刺激物如海藻糖二山嵛酸酯（TDB）病毒样颗粒或乳剂等。在许多情况下，这些替代品能够引发强大的细胞和体液的局部或全身性免疫反应，比CFA副作用少。佐剂的使用必须经过动物福利伦理委员会的批准，能引起严重反应的佐剂使用时必须科学合理。

 

 

CFA，矿物油含有悬浮全或粉热杀死结核分枝杆菌，与感兴趣抗原的溶液一起乳化形成水油乳状液，注射后对增强细胞免疫和体液抗体反应是有效的。佐剂活性是一种油沉积抗原的持续释放与局部天然免疫的刺激反应，从而增强适应性免疫。此反应的一个重要组成部分是抗原沉积的部位，由于白细胞大量涌入而引起的剧烈炎症反应及其与抗原的相互作用。CFA是一种重要的生物资源，研究人员应负责任和小心地使用，以避免或减少过度炎症的副作用。CFA可能导致注射部位局部炎症和肉芽肿性反应，淋巴结结构改变，慢性炎症，皮肤溃疡，局部脓肿或组织脱落，弥漫全身肉芽肿继发的乳化油，关节炎，慢性消耗性疾病。对于大多数应用程序，CFA通常只有必要的初始免疫，而不完全弗氏佐剂（IFA），缺乏分枝杆菌，为后续选择的辅助免疫。

 

 

下面的指引已被证明能有效地显著地缓解使用免疫佐剂后并发症。（a）无菌技术在抗原佐剂制备中的应用（b）注射部位的无菌制备；C）适宜的注射技术；d）分散注射部位；e）在每个注射部位使用较小的体积都证明了有效的消除免疫后副作用

 

1） 抗原制剂应是无菌的，理想的情况是，等渗，PH值中性，无尿素、醋酸和其他有毒溶剂。使用聚丙烯酰胺凝胶分离的抗原应进一步纯化为了减少凝胶碎片的继发性炎症/刺激量如果进一步纯化是不可能的，那么聚丙烯酰胺污染物的量应尽量减少例如抗原，Millipore超滤，以将其与现有的佐剂混合，建议去除外来微生物污染。

 

2）CFA的分枝杆菌重新涡流或摇动安瓿或小瓶悬浮。安瓿或小瓶的CFA使用无菌技术。虽然方法可能有所不同，一部分或更少的CFA一部分水溶液（V/V）抗原已被推荐。要小心混合CFA /抗原乳剂避免引入气泡。

 

3）CFA中含有0.5mg/ml的分枝杆菌成分并被许多研究人员成功使用。建议使用浓度为0.1mg/ml，以尽量减少炎症和局灶性坏死.如果需要更高的浓度，需要经过IACUC的批准。

 

4）含结核分枝杆菌的细胞，而不破坏制剂的使用，完整的杆菌可能是首选，因为从组织学它难以同抗酸细胞区分。

 

5）获得良好的结果，同时尽量减少不良副作用，推荐使用符合实验目标的合理的注射体积和位点，动物大小。

 

6）一些注射路线可能比其他路线对动物的破坏性较小。只要有可能，应利用最小侵入性的方法来完成实验的目标。应该避免真皮内，肌肉，和足底注射，除非阐明科学合理性。

 

7）分离多个注射部位是必要的以避免聚结炎性病变。

 

8）建议接种周期最少间隔2周。

 

9）除了给药途径外，注射部位也应谨慎选择.避免可能危及动物正常移动或活动区域（例如，皮内注射选择兔子的脖子颈背）。

 

 

1、足底免疫：利用足底免疫小老鼠在研究中可能是必要的。需要分离引流淋巴结作为主要作用部位。限制注入足底佐剂抗原的数量、剂量，每个实验动物只使用一只足，放置在柔软的垫料上而不是硬垫料。足底接种不能用于无科学依据的啮齿类动物常规免疫。选择使用潜在的引流淋巴结，如跗关节，腘淋巴结。应使用颈部位，耳淋巴结和颈浅淋巴结，以防止动物的运动受到影响。

 

2、 腹膜渗出物：通过腹腔注射抗原和佐剂生产鼠腹腔渗出物是公认的，有效的科学程序。痛腹胀不良影响和由此产生的痛苦可以通过日常监测和减轻腹水压力来避免或终止实验。小鼠体内腹腔注射CFA抗原乳剂一般应小于0.2ml。

 

3、注射后观察和治疗：应该每天监测注射后动物的疼痛和窘迫或并发症，至少四个星期或直到所有病变愈合。支持疗法可能包括局部清洁，应用无菌凡士林和/或氢过氧化物、抗生素和镇痛药。如果明显的疼痛或痛苦是预期或观察到的，使用麻醉激动剂，混合激动剂拮抗剂，或在主治兽医的指导下使用适当的代理。由于已知的对免疫过程的影响，类固醇或非甾体抗炎药必须谨慎使用.

 

4、人员安全 ： 含有分枝杆菌佐剂的佐剂可以对实验室工作人员产生职业危害应谨慎处理与护理。已有人类偶然针穿刺后出现临床疼痛相关的炎性病变，和结核菌素阳性脓肿形成的临床报道。结核阴性的人偶然暴露于CFA后，结核菌素试验结果呈阳性。应该佩戴安全眼镜以避免CFA偶然飞溅入眼睛。

 

5、其他考虑：科学家制备抗原用于体内给药与辅料应该意识到污染物质和注射液可能会增加炎症作用。应考虑和消除额外任何可能的炎症刺激，制备过程保证无菌。 

表一： CFA抗原乳剂推荐位点剂量和使用途径

品种	皮下注射（ml）	皮内注射（ml）	腹腔注射（ml）	足底注射（ml）	肌肉注射（ml）
小鼠	<0.1	*	<0.2	<0.05**	<0.05**
大鼠	<0.1	<0.05**	<0.5	<0.1**	<0.1**
兔	<0.25	<0.05**	*	*	<0.25**
非人灵长类	CFA不推荐用于非人类的灵长类动物，因为它可能干扰结核病检测结果并引起过度炎症。然而，一些模型需要使用CFA。如果使用的话，推荐剂量不应超过家兔用量，应科学合理。

l      *不推荐

l      **仅科学合理