高血压防治的研究中，自发性高血压大鼠(SHR)是国内外常用实验动物。 SHR的证候特征如何?不同证候是否具有其独特的物质基础?辨病论治和辨证论治的疗效是否存在差异?为此，我们开展了以下研究：

①在SHR中筛选气盛和气虚大鼠，用于证候物质基础的研究。②所剩余 SHR随机分组，进一步观察其证候的演变，并开展辨证论治及其疗效评价。

一、SHR不同证候的物质基础研究

(一)材料与方法

1．实验动物

16周龄雄性Wistar大鼠30只，生产许可证号：SCXK(沪)2003-0002；16周龄雄性SHR50只，生产许可证号：SCXK(沪)2003-0003，以上均购自中科院上海实验动物中心。清洁级条件下常规饲养。

2．材料与试剂

Trizol(GIBCO BRC)、RNeasy Mini Kit(QIAGEN)、RNA Nano LabChip及 GeneChip Rat Exon 1.0 ST Array及其试剂盒(2008年)。

3．主要仪器

Agilent-bioanalizer 2100，以及Affymetrix的芯片杂交炉、芯片洗涤系统、芯片扫描仪等。YLS-13A大围/小鼠抓力测量仪，其余四诊计量化检测及血压测量设备同本章第四节。

4．实验方法

(1)分组

Wistar雄性大鼠30只作为正常对照组，SHR50只作为模型组。

(2)证候大鼠的确定

以第1次检测作为参考，以第2次检测为准。辨证并筛选出最为典型的正常、正常气虚证大鼠各2只，SHR气盛大鼠4只，SHR相对气虚大鼠4只。

(3)不同证候高血压大鼠处死与取材

于第2次检测后处死以上各证候和正常对照大鼠，取下丘脑、垂体、甲状腺、肾脏、肾上腺、睾丸6种组织。

5．指标检测

(1)组织RNA的提取与检测

以上共4组样本采用Trizol和RNeasy Mini Kit及其方法分离和纯化RNA；采用RNA Nano LabChip和方法检测RNA的质量。

(2)芯片检测

采用Affymetrix的GeneChip Rat Exon 1.0 ST Array及其试剂盒所建议的检测方法。依据检测结果和Affymetrix建议的方法，采用iterPlier法计算核心基因表达读数计算值。

以上RNA质量和芯片检测委托上海生物芯片有限公司完成。

6．数据处理

于动物饲养后一周进行第1次四诊检测，记为实验第1日即1st，第24日进行第2次检测，记为2nd。计量化辨证标准如下：

(1)气虚程度

气虚程度＝(各动物水平/正常组均数)×0.3＋(各动物直立/正常组均数)×0.2＋(各动物抓力/正常组均数)×0.5

辨证标准：与正常组比较，＞1.30为气盛，＜0.9为气虚，＜0.8为气亏，＜0.7为气损。

(2)血虚程度

血虚程度＝(各动物爪r值/正常组均数)×0.8＋(各动物尾r值/正常组均数)×0.2

辨证标准：与正常组比较，＞1.1为血充盈，＜0.95为血虚，＜0.85为血虚重，＜0.75为血亏。

(3)阴虚程度

阴虚程度＝各动物体重/正常组均数

辨证标准：与正常组比较，＞1.2为形丰，＜0.75为阴虚，＜0.6为阴亏，＜0.5为阴竭。

(4)阳热程度

阳热程度＝(各动物腋温/正常组均数)×0.3＋(各动物爪r值/正常组均数)×0.5＋(各动物尾r值/正常组均数)×0.2

辨证标准：与正常组比较，＞1.05为阳盛，＜0.95阳虚，＜0.90阳亏，＜0.80

(5)肝气程度    肝气程度＝((各动物抓力/正常组均数)/((各动物水平/正常组均数)×0.6＋(各动物直立/正常组均数)×0.4))

(二)实验结果

1．Wistar大鼠及SHR证候程度的变化

期间共检测2次，2次证候的演变如图4-5-1～图4-5-5所示。SHR有气血虚，2nd检测向Wistar大鼠靠近；SHR的体重轻，与Wistar大鼠比较接近阴虚，这可能与SHR的动物品系有关；SHR阳热程度在正常范围内有上升的趋势； SHR的肝气程度也低于Wistar大鼠。

2．用于芯片检测的动物证候情况

获得正常、正常气虚证大鼠各2只，SHR气盛大鼠4只，SHR相对气虚大鼠4只。筛选时以气虚程度为主要标准，同时参考其他指标。筛选出的大鼠证候情况如下：气虚程度上有所区别；血虚程度、阳热程度上基本持平且在正常范围内；在阴虚程度上的区别，可能与动物品系有关；肝气程度除正常Wistar大鼠外，其他组内个体差异较大(图4-5-6)。

 

3．RNA质量检测和芯片检测结果

参见另文，略。

二、SHR个体化辨证论治及疗效评价

(一)材料与方法

1．实验动物

使用前次实验所剩余的大鼠，包括：雄性Wistar大鼠26只；雄性SHR42只。

2．主要仪器

所有四诊及血压测量设备同前。

3．药物与试剂

(1)西药

参考有关文献后，采用ACEI(血管紧张素转换酶抑制剂)和CCB(钙离子拮抗剂)联合应用的方法，具体如下：培哚普利片，4mg/片，购白天津施维雅制药有限公司，批号8E0465；苯磺酸氨氯地平片，5mg/片，购自上海海尼药业有限公司，批号08071301。

(2)中药

1)血瘀方：当归10g、川芎10g、赤芍15g、桃仁10g、红花5g。

2)气虚方：黄芪15g、生晒参10g、白术10g、茯苓10g、炙甘草5g。

3)气盛方：郁金10g、元胡10g、香附10g、栀子10g、酸枣仁10g。

4)阳盛方：知母10g、栀子10g、黄柏10g、车前子10g、杭菊10g。

5)阴虚方：熟地黄10g、生地10g、山茱萸10g、枸杞子10g、麦冬10g。

6)阳虚方：淫羊藿10g、杜仲10g、山茱萸10g、肉苁蓉10g、菟丝子10g。

4．实验方法

(1)分组

在前次实验第2次检测后的次日，选取剩余26只大鼠中的15只作为正常对照组，其余42只大鼠根据第2次检测及辨证结果，分层进入各组，具体为：13只入模型对照组，15只入西药治疗组，14只入中西医结合辨证论治组(简称中西辨证组)。

(2)辨证论治方案

1)西药治疗对照组。培哚普利＋氨氯地平，培哚普利为0.4mg/kg·d，氨氯地平0.5mg/kg·d，按照体表面积折算后相当于成人每日最低用量公斤体重的6倍。

2)中西医结合辨证论治组。以血瘀方1/4为基本方(即0.5ml)，出现某一证则加1/4对应方，不足则补充水至2ml(大于则均等减少，使总量为2ml)。每周辨证1次，调整用药；治疗4周，每周用药5日，停2日。

中药采用标准水煎醇沉工艺，浓缩至含生药2g/ml，保存于4℃冰箱。使用时，中药加温至37℃。

5．指标检测

(1)四诊指标检测

四诊指标检测、辨证方法及标准同前。以实验一的第2次检测作为开始，记为2nd，此后每周检测1次，共4次，分别记为3rd，4th，5th和6th。

(2)血压、心率测定

与四诊检测同步，共检测4次。每次每只测量3～4次取平均值。

(3)心脏、心脏/体重值(HW，HW/BW)

实验结束后，大鼠断头处死，快速取出心脏入4℃生理盐水中，随即取出滤纸吸干并称重。称重完毕入bouin液固定，一段时间后取出，由固定液换至乙醇中，乙醇浓度按70％→50％→30％递换后，准确称量，并计算其与体重的比值，作为心室肥厚的指标。

6．统计分析

采用SPSS11.5统计分析软件，组间比较采用单因素方差分析(ANOVE)，检验水准α＝0.05。各变量以均数±标准差(-x±s)表示。

(二)实验结果

1．动物死亡情况

实验期间因为灌胃不当，西药治疗组和中西辨证组各死亡1只。

2．血压(收缩压)

在用药后第1周、2周、3周、4周各组与正常对照组比较，血压值上升(P＜0.05)；两个用药组与模型组比较，血压值下降(P＜0.05)，表明治疗具有一定的疗效。与西药治疗组相比，中西辨证组的血压多次检测略低于单纯西药，但差异无统计学意义，见表4-5-1、图4-5-7。

3．心率

在用药3周后西药治疗组与正常对照组比较，心率值下降(P＜0.05)。两治疗组差别不明显，对心率影响不大，见表4-5-2、图4-5-8。

    4．心脏重量、心脏重量/体重值

    与正常对照组比较，模型对照组及两个治疗组心脏重量增N(P＜0.05)；与模型对照组比较，西药治疗组心脏重量有所下降(P＜0.05)；与正常对照组比较，模型对照组及西药治疗组心脏重量/体重比值上升(P＜0.05)，而中西辨证组对指标有改善，见表4-5-3、图4-5-9、图4-5-10。

综合以上结果，两个治疗方案均有效；相比之下，中西辨证治疗略优于单纯西药治疗组。

5．气虚程度

总体上，SHR抓力在多次检测中大于正常对照(图4-5-11)；水平移动和垂直站立次数频繁，实验之初尤为明显(图4-5-12、图4-5-13)；由此，在整个实验过程中表现为气盛(图4-5-14)，近似于肝阳上亢。其中，其他3组第2nd、4th气虚程度均高于正常对照组(P＜0.05)，第3rd、5th、6th西药治疗组气虚程度高于正常对照组(P＜0.05)。与模型对照组比较，第4th、5th西药治疗组及中西辨证组有统计学差异(P＜0.05)。与西药治疗组相比，中西辨证组的气盛衰程度最贴近正常对照组，故提示中西医结合辨证论治在改善SHR气盛方面有一定的优势。

6．血虚程度

与正常对照组比较，SHR爪色偏淡(图4-5-15)，可能与血压高、爪的小血管收缩有关；但尾色却偏红(图4-5-16)。由此导致血虚程度多低于正常对照组(图4-5-17)。其中，第2nd、3rd、4th、5th模型及治疗共3个组及第6th模型对照组与正常对照组比较，差异具有统计意义(P＜0.05)，且第3rd中西辨证组达到血虚辨证标准。经西药治疗和中西医结合辨证论治，SHR爪色偏淡程度有改善趋势，与血压降低的趋势一致。

7．阴虚程度

SHR体重较轻，与同龄Wistar大鼠对照组比较有统计学差异(P＜0.05)，并维持至实验结束(图4-5-18)。鉴于SHR体重轻，却有气盛表现(图4-5-11～图4-5-14)，似为阴虚阳亢。

8．阳热程度

SHR腋温偏高，与正常对照组比较，第2nd西药治疗组、第3rd模型对照组及两治疗组、第5th模型对照组及中西辨证组之间差异有统计学意义(P＜0.05)(图4-5-19)。而且心率多快于正常对照(表4-5-2)，以及有气盛表现(图4-5-11～图4-5-14)，提示存在阴虚阳亢的证候。

然而，鉴于阳热程度由腋温和爪、尾红色程度综合换算获得，且后者权重较大，因此所见阳热程度多低于正常对照大鼠。治疗后，中西辨证组最贴近正常对照组(图4-5-20)。

9．肝气程度

我们尝试以抓力或旷场反映肝气程度，推测肝气亢盛大鼠，该比值可能会加大，即保护性反应会增强(抓力)、自主运动会减弱(旷场)；若相反则表现为肝气不足。结果未能见到高血压大鼠有肝气亢盛的表现(图4-5-21)。与正常对照组比较，仅在第2nd西药治疗及中西辨证组、第4th模型对照组、第5th模型对照组及中西辨证组之间差异有统计学意义(P＜0.05)；各治疗组与模型组接近。

10．同病异证

(1)同一个体存在证候的演变

图4-5-22为西药治疗组No.69大鼠，该鼠持续表现为阴虚；第2nd检测表现出肝气盛，经过1周的治疗肝气盛证消失，其后第3rd、4th、5th均无它证可辨，第6th检测出现了气盛。提示一些由疾病引发的证候，如肝气盛，一旦疾病得到控制。证候可望改善。

(2)不同个体间存在证候的差异

图4-5-23为模型组大鼠的同病异证情况，第6th检测时，No.47大鼠出现肝气亢盛，No.49大鼠无气虚，亦见肝气亢盛，而No.61大鼠出现气盛，却见肝气不足。

同样的处理因素，不同个体之间也会出现不同的反映。图4-5-24为3只经相同西药治疗的大鼠，表现出同病异证的情况，第6th检测时，No.36大鼠出现气盛，No.37大鼠无明显证候偏向，No.69则出现肝气亢盛表现。

11．个体辨证论治疗效评价

(1)气盛证个体证候比较

选取个体第2nd时均表现出气盛证，而第3rd气盛证几乎全部消失者(图4-5-25)。提示气盛证候会自然发生演变，辨证论治有一定的帮助作用。

(2)辨证论治对个体血压值的影响

同为气盛证大鼠，中西辨证组(n=6)第3rd较第2nd下降程度最大，西药治疗组(n=8)次之，而模型对照组(n=9)血压值处于上升趋势。提示西药起到了降压作用，而加用活血化瘀药及辨证论治似有助于提高疗效(图4-5-26)。

三、讨论

1)SHR血压升高，西药治疗有效，中西医结合辨证论治作用有增强疗效的倾向。

2)与正常大鼠对照，SHR持续气盛、腋温偏高、心率偏快，具有肝阳上亢的表现。与西药治疗组相比，中西辨证组的气盛衰程度最贴近正常对照组，提示在改善 SHR气盛方面具有一定的优势。

3)SHR虽然存在同病异证，但个体间证候及其严重程度比较接近。这可能与实验动物尚处于中青年阶段有关，随着疾病的延续和月龄的增长，其证候的个体化差异可能会变得愈来愈明显。

4)同龄大鼠，SHR体重轻者，表现为阴虚。但是考虑到可能与品系因素有关，且仅仅以体重改变作为阴虚的辨证依据，尚嫌不够。这也可能是个别达到阴虚证辨证标准的SHR，经予滋阴小复方辨证论治，未见疗效的原因。

5)SHR爪色偏淡，经西药和中西医结合辨证论治，其爪色偏淡程度有改善趋势。

6)在中药辨证论治中，血瘀方贯穿始终，这是基于我国以往活血化瘀研究的成果，发现高血压患者存在血瘀病理改变；就血压和爪色有改善倾向看，这样的中西医结合辨证论治是有益的。

总之，以上研究提示，中西医结合辨证论治可以在一定程度上增加降压疗效、降低心脏/体重比，改善证候，具有积极意义；而如何不断优化辨证论治方案，是我们今后努力的方向。