时间安排

主讲内容

4月7日上午：9:00-12:00

理论一、基因组靶向修饰技术简介

（1）基因功能研究的分子遗传学技术简介

（2）基于NHEJ修复的基因敲除和基于HR修复的基因敲入 

（3）ZFN和TALEN技术

（4）CRISPR-Cas9技术     

理论二、CRISPR的设计

（1）目标基因结构及功能的生物信息学分析

（2）CRISPR的设计原则

（3）CRISPR的在线设计（可自带可无线上网之笔记本电脑或手机）（在线互动设计演练）

4月7日下午13:00-17:00

理论三、基因组编辑工具递送至生物体细胞内的策略

（1）靶向编辑基因的基因型确认

（2）基因组编辑工具之DNA表达元件的制备与递送策略

（3）基因组编辑工具转录产物制备及递送策略

（4）基因编辑工具RNP的制备与递送策略

实验（或技术细节答疑）一： CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（1）

（1）CRISPR模板引物的订购

（2）CRISPR模板的退火

（3）退火CRISPR模板与线性化CRISPR/Cas9 All-in-One载体的重组

（4）大肠杆菌的转化

（5）转化子的涂板培养

4月8日上午：9:00-12:00

理论四、sgRNA活性验证

（1）体外法（2）体内法：插入缺失（Indel）突变检测的基本策略； 基于胚胎反应器的活性验证方法；基于细胞系的活性验证方法

实验（或技术细节答疑）二：CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（2）

基因组编辑工具之CRISPR/Cas9 All-in-One重组子的快速验证法（PCR法） 

实验（或技术细节答疑）三：基因组编辑子等位基因的基因型鉴定

（1）基因组DNA模板制备（2）目标基因的基因组DNA片段的PCR扩增

理论五、利用CRISPR技术创建基因组编辑人及动物细胞系

（1）创建基因组编辑细胞系的基本过程（2）基因敲入的供体DNA的设计原则及基因敲入供体设计实例（3）表达CRISPR的All-in-One表达质粒（和供体）导入细胞系的方法（4）阳性细胞克隆筛选（5）靶向突变的基因型鉴定及基因组编辑细胞系的建立（6）敲入基因和敲除基因（无效等位基因）的确认（7）建立基因组编辑细胞系的优选策略

4月8日下午13:00-17:00

理论六、利用CRISPR技术创建基因敲除或敲入动物

（1）创建基因组编辑动物突变体的基本过程（2）sgRNA/Cas9 mRNA（和供体）共显微注射入受精卵中建立初建者（3）初建者体细胞携带靶向突变等位基因的确认（4）基因敲除/敲入动物（F1）的鉴定（5）基因敲除/敲入动物品系（F2）的建立（6）敲除/敲入基因的确认（7）建立基因敲除或敲入突变体动物的优选策略

理论七、利用CRISPR技术创建基因敲除或敲入植物

（1）创建基因组编辑植物突变体的基本过程（2）双元载体的转染（3）基因敲除/敲入植物（F1）鉴定

实验（或技术细节答疑）四：实验结果的点评与讨论

（1）CRISPR/Cas9 All-in-One重组子的PCR产物电泳检测结果点评  （2）基因组编辑等位基因的基因型鉴定电泳检测结果的点评（3）测序是验证基因组编辑结果的金标准

4月9日上午：9:00-12:00

理论八、基因组编辑技术的脱靶问题

（1）脱靶的产生原因（2）脱靶检测（3）解决脱靶问题的方法（4）脱靶问题对不同领域研究者的意义

理论九、利用CRISPRi或CRISPRa技术调控基因在细胞中的表达

（1）dCas9的特征简介（2）运用CRISPR技术调控基因在细胞中表达的基本实验过程（3）CRISPR技术的转录抑制（4）CRISPR技术的转录活化

理论十、CRISPR技术的伦理学问题

（1）新型基因组编辑技术的发展（碱基编辑）（2）基因组编辑技术的应用（3）基因组编辑技术对未来社会的革命性的影响（4）基因组编辑技术的伦理学问题

4月9日下午

12点结束全部课程