第一天上午9:00-12:00

第一讲、基因组靶向修饰技术简介

1、基因功能研究的分子遗传学技术简介；

2、基于NHEJ修复的基因敲除和基于HR修复的基因敲入；

3、ZFN和TALEN技术；

4、CRISPR/Cas9技术

第二讲、CRISPR的设计

1、目标基因结构及功能的生物信息学分析；

2、CRISPR的设计原则；

3、CRISPR的在线设计（可自带可无线上网之笔记本电脑或手机）；

4、靶向编辑基因的基因型确认及CRISPR的再设计

第一天下午13:00-17:00

第三讲、基因组编辑工具的制备及向细胞内的递送策略

1、基因组编辑工具之DNA表达元件的制备与递送策略；

2、基因组编辑工具转录产物制备及递送策略；

3、基因编辑工具RNP的制备与递送策略

实验（或技术细节答疑）一： CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（1）

1、CRISPR模板引物的准备；

2、CRISPR模板的制备；

3、退火CRISPR模板与线性化CRISPR/Cas9 All-in-One载体的重组；

4、大肠杆菌的转化；

5、携带基因组编辑工具的转化子的涂板培养

第二天上午9:00-12:0

第四讲、sgRNA活性验证

1、体外法；

2、体内法：2.1 插入缺失（Indel）突变检测的基本策略；2.2 基于胚胎反应器的活性验证方法；2.3 基于细胞系的活性验证方法。

实验（或技术细节答疑）二：CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（2）

基因组编辑工具之CRISPR/Cas9 All-in-One重组子的快速验证法（PCR法） 

实验（或技术细节答疑）三：基因组编辑子等位基因的基因型鉴定

1、基因组DNA模板制备；2、目标基因的基因组DNA片段的PCR扩增

第二天下午13:00-17:00

第五讲、利用CRISPR技术创建基因组编辑人及动物细胞系

1、创建基因组编辑细胞系的基本过程    2、基因敲入的供体DNA的设计原则及基因敲入供体设计实例

3、表达CRISPR的All-in-One表达质粒（和供体）导入细胞系的方法  4、阳性细胞克隆筛选    5、靶向突变的基因型鉴定及基因组编辑细胞系的建立 6、敲入基因和敲除基因（无效等位基因）的确认   7、建立基因组编辑细胞系的优选策略

第六讲、利用CRISPR技术创建基因敲除或敲入动物

1、创建基因组编辑动物突变体的基本过程；2、sgRNA/Cas9 mRNA（和供体）共显微注射入受精卵中建立初建者；3、初建者体细胞携带靶向突变等位基因的确认；4、基因敲除/敲入动物（F1）的鉴定；5、基因敲除/敲入动物品系（F2）的建立；6、敲除/敲入基因的确认；7、建立基因敲除或敲入突变体动物的优选策略。

第七讲、利用CRISPR技术创建基因敲除或敲入植物

1、创建基因组编辑植物突变体的基本过程；2、双元载体的转染；3、基因敲除/敲入植物（F1）鉴定。

实验（或技术细节答疑）四：实验结果的点评与讨论

1、CRISPR/Cas9 All-in-One重组子的PCR产物电泳检测结果点评；2、基因组编辑等位基因的基因型鉴定电泳检测结果的点评；3、测序是验证基因组编辑结果的金标准

第三天上午9:00-12:00（12:00以后课程结束）

第八讲、基因组编辑技术的脱靶问题

1、脱靶的产生原因；2、脱靶检测；3、解决脱靶问题的方法；4、脱靶问题对不同领域研究者的意义。

第九讲、利用CRISPRi或CRISPRa技术调控基因在细胞中的表达

1、dCas9的特征简介；2、运用CRISPR技术调控基因在细胞中表达的基本实验过程；3、CRISPR技术的转录抑制  4、CRISPR技术的转录活化。

第十讲、CRISPR技术的伦理学问题

1、 新型基因组编辑技术的发展（碱基编辑）；2、基因组编辑技术的应用；3、基因组编辑技术对未来社会的革命性的影响；4、基因组编辑技术的伦理学问题。