利用CRISPR-Cas9系统敲除小鼠黑色素瘤细胞系MATP基因的初步研究

来源:中国比较医学杂志 2017年第04期 发布时间:2017年05月26日 浏览次数: 【字体: 收藏 打印文章

目的 利用CRISPR/Cas9系统,敲除小鼠黑色素瘤细胞系的MATP基因,为MATP基因的功能研究奠定基础。

方法 利用http://crispr.mit.edu/网站,设计针对MATP的特异性引物,并将引物链接到pCAS9/gRNA1载体。将阳性载体转染小鼠黑色素瘤细胞系B16F10,利用无限稀释的方法获得转染后的单克隆细胞株。提取不同细胞株的基因组,通过测序的方法进一步筛选出发生MATP基因切割的细胞株,并利用Western-blot的方法验证MATP的表达情况。

结果 成功获得了3株MATP基因敲除的细胞株,Western-blot结果表明,该细胞株不表达MATP蛋白。

结论 利用pCAS9/gRNA1载体,可以实现B16F10细胞系MATP基因的敲除。

 

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