大鼠模型:CRF1受体拮抗剂影响抗抑郁药物在强迫游泳实验中的活性

来源:Naunyn-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology August 2017, Volume 390, Issue 8, pp 769–774 发布时间:2017年07月24日 浏览次数: 【字体: 收藏 打印文章
简介:下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)过度活跃和中枢促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)系统受损是抑郁症发病的诱因。虽然在几个公认的行为测试中CRF1受体拮抗剂抗抑郁活性有效,CRF1受体抑制剂和传统的抗抑郁药物之间潜在的相互作用仍知之甚少。我们研究的目的是评估sn003,CRF1受体阻滞剂,抗抑郁药物丙咪嗪和盐酸氟西汀对有抑郁症状在大鼠强迫游泳试验(FST)中的活性影响。雌性wistar大鼠, 14天皮下注射皮质酮(CORT)(20毫克/公斤/天)。抗抑郁药的作用是由FST和下丘脑、杏仁核和外周血CRF水平由高灵敏度免疫酶试验确定。sn003(0.5 mg/kg)增强丙咪嗪(15毫克/公斤)和氟西汀(7.5毫克/公斤)的抗抑郁作用。两测试试剂的共同使用,取消CORT所致CRF水平增加。我们目前的发现进一步证明了CRF活性的抑制可能有助于治疗情绪障碍。抗抑郁药与CRF1受体拮抗剂同时使用,在安全性方面是有益的,因为它使用较低剂量的药物。
 
关键词:CRF1受体拮抗剂  丙咪嗪  氟西汀  强迫游泳实验  促肾上腺皮质激素释放因子水平  大鼠
 
简介:观察到抑郁症患者下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)的过度活跃,被认为是该病发病机制中的一个重要因素。虽然HPA轴对内分泌应激反应至关重要,促肾上腺皮质激素释放因子(CRF),也被称为促肾上腺皮质激素释放激素,在调节神经内分泌反应中起重要作用。CRF在下丘脑室旁核小细胞神经元作为一种激素,而CRF在大脑的其他区域产生作为一种神经递质。在紧张的情况下,观察到CRF合成和释放增加,这反过来又触发的促肾上腺皮质激素(ACTH)的释放,其次是较高的合成及糖皮质激素皮质醇的释放(灵长类动物)和皮质酮(啮齿类动物)。在健康受试者中,糖皮质激素会产生负反馈,导致CRF、促肾上腺皮质激素和皮质醇/皮质酮的合成和释放减少。在抑郁的受试者中,HPA负反馈回路可能受损。CRF水平升高不仅导致神经内分泌改变,而且也影响到与应激反应相似的行为和生理变化(增加心率、失眠、抑制陌生环境中的探索行为、疏导行为、性兴趣和食物摄入下降)。CRF的作用通过两种不同的CRF受体(CRF1和CFR2),参与焦虑和抑郁相关行为的调制。特别是给定的CRF1受体作为潜在的抗抑郁活性物质的目标。高CRF1受体密度在大脑皮层,小脑、嗅球、海马、杏仁核、内侧隔核、垂体被发现。CRF1受体拮抗剂是公认的对行为测试(即大鼠强迫游泳试验,FST;悬尾实验,TST)和动物模型(慢性应激模型,慢性青少年应激)评价抗抑郁新的药物作用有效。在我们以前的研究中,我们还发现一个高亲和力的非肽类CRF1受体拮抗剂,显示> 1000倍的选择性CRF2受体-sn003-具有抗抑郁活性。非肽类化合物似乎具有特殊的价值,因为基于肽的CRF受体拮抗剂是不能通过血脑屏障渗透的。对CRF1受体阻滞剂的抗抑郁疗效的临床试验的患者因不良反应停止。观察到的作用与帕罗西汀(即选择性5-羟色胺再摄取抑制剂)的作用相当,停药后的情感症状明显恶化。
 
现有资料表明,CRF1受体阻断可能成为治疗抑郁症的另一个策略。对CRF1受体和常规抗抑郁治疗的抑制剂之间的相互作用知之甚少。我们决定评估sn003对丙咪嗪(三环类抗抑郁药)和氟西汀(一种选择性5-羟色胺再摄取抑制剂)在皮质酮(CORT)处理大鼠FST试验中的活性的影响。sn003,作为CRF1受体抑制剂完全拮抗CRF效果。最近发现,sn003有双重作用,即,除了抗抑郁药的潜力还降低逼尿肌反射亢进的症状。从临床的角度来看,这种化合物的特性是非常重要的,因为膀胱过度活动症和抑郁症常常共存,并对生活质量产生重大影响。在目前的研究中使用CORT抑郁症模型。14天的CORT治疗组大鼠导致循环血清CRF水平升高,从对照组的6.41 ± 0.28 pg/ml升高到给药CORT组(20毫克/公斤/天)的23.39 ± 1.13 pg/ml。长期用糖皮质激素处理的大鼠可能是测试CRF拮抗剂作用的一个非常有趣的模型。
 
材料和方法:动物:雌性Wistar大鼠,体重200-225克,12/12光/暗周期,温度22±1°C,湿度60%。动物自由采食和饮水。将大鼠随机分为10个实验组,每组13~15个:第一组(对照组)给予生理盐水14天;第二组皮质酮(20毫克/公斤/天)给药14天;第三组皮质酮(20毫克/公斤/天)14天,加丙咪嗪(30毫克/公斤);第四组皮质酮(20毫克/公斤/天)14天,加丙咪嗪(15毫克/公斤);第五组皮质酮(20毫克/公斤/天)14天,加氟西汀(15毫克/公斤);第六组皮质酮(20毫克/公斤/天)14天,加氟西汀(7.5毫克/公斤);第七组皮质酮(20毫克/公斤/天)14天,加上sn003(1毫克/公斤);第八组皮质酮(20毫克/公斤/天)14天,加上sn003(0.5毫克/公斤);第九组皮质酮(20毫克/公斤/天)14天,加丙咪嗪(15毫克/公斤),加上sn003(0.5毫克/公斤);第十组皮质酮(20毫克/公斤/天)14天,加氟西汀(7.5毫克/公斤),加上sn003(0.5毫克/公斤)。
 
药物:使用下列药物:皮质酮(CORT)、丙咪嗪(IMI),氟西汀(FLX),和sn003。在前期实验的基础上,选择了剂量和预处理方案。CORT,IMI和FLX分别溶于生理盐水,sn003溶解在积约100μL的二甲基亚砜(DMSO),稀释于生理盐水,导致最终浓度约为1%的DMSO。CORT(20毫克/公斤/天)或生理盐水皮下注射(SC)14天,IMI(15或30毫克/公斤)和氟西汀(7.5或15毫克/公斤)腹腔注射(ip),sn003(0.5或1毫克/公斤)静脉注射(IV)。除了皮质醇药物均给予单剂量。最后一次皮质醇给药后48小时及IMI、FLX或sn003注射后60 min。所有给药溶液的体积为10毫升/千克。
 
强迫游泳实验:FST是按照前面描述的方式执行的。起初,动物被单独放入玻璃缸(高度65厘米,直径25厘米),含48厘米的水(23 - 25°C),并在那里停留15分钟(预试)。24小时后,大鼠在相同游泳条件下重新测试5 min。当一只动物被动地浮在水面上时,只做缓慢的动作以保持它的头在水面上它被认为是不动的。
 
自发活动:一个Digiscan装置、光学动物活动监测系统,用于对大鼠的自发活动的评价。将动物分别放入活动室内,适应15分钟后,自动测量自发活动1小时。
 
促肾上腺皮质激素释放因子测定:在下丘脑、杏仁核和外周血中测定CRF水平。为了避免HPA轴激素的昼夜变化,CORT /生理盐水是在上午8和9点之间给药。动物在行为测试后立即被杀死。收集外周血,分离下丘脑和杏仁核。脑结构匀质化。通过一个高灵敏度免疫酶试验确定CRF水平。
 
结果:FST:使用2周CORT后,显著降低大鼠在FST试验中的活动。单剂量IMI给药(30毫克/公斤;F(2,42)= 19.36;P<0.0001),氟西汀(15毫克/公斤;F(2,42)= 13.12,P<0.0001),或sn003(1毫克/公斤;F(40)= 34.70,P<0.0001)逆转CORT引起的抑郁。测试剂的剂量较低时(15,7.5,或0.5毫克/公斤)不影响CORT反复给药引起的动物行为。然而, IMI(15毫克/公斤)或氟西汀(7.5毫克/公斤)与sn003(0.5 mg/kg)联合给药取消应用糖皮质激素促抑郁活性。单因素方差分析显示试验组之间有显著性差异。
 
自发活动:与对照组相比,没有一种单独或联合注射的试验药物影响大鼠的自发活动。
 
CRF水平:皮质酮(20毫克/公斤/天)给药14天后,在下丘脑(t(27)= 12.35,P<0.0001),杏仁核(t(27)= 4.25,P<0.0002),与外周血(t(27)= 17.49,P<0.0001)CRF水平升高。单剂量IMI,FLX和SN003在较高剂量时能逆转CORT影响。低剂量的FLX(7.5 mg/kg)或sn003(0.5 mg/kg)降低外周血或下丘脑和杏仁核CRF升高水平。较低剂量的抗抑郁药(IMI或FLX)与低剂量的sn003同时给予废除CORT诱导下丘脑、杏仁核、和外周血CRF水平的增加。
 
结论:证据表面CRF的活性被阻断可能是治疗抑郁症的有效手段,无论是单药治疗还是联合使用传统的抗抑郁药物。抗抑郁药与CRF1受体拮抗剂同时使用,在安全性方面是有益的,因为它需要较低剂量的药物。然而,结果需要通过更多的研究来证实,包括不同抑郁模型的实验。
 
 
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