一种可以“杀死癌症”的病毒，三年前在全球首次发现时引发轰动。现在，这种抗癌新药“溶瘤病毒 M1”的研究有了最新进展。中山大学药理学教授颜光美的团队称，不仅在猴子这一非人灵长类动物身上证实了 M1 病毒的安全性，还发现和其他药物联用让 M1 增效的机制。颜光美还带来了临床试验的最新消息，“预计 2018 年可以进行 M1 病毒的临床试验。”

或可享受绿色通道

药物有望快速进入临床试验

2014 年，颜光美的实验团队在全球内首次发现，在自然界存在的病毒 M 1 具有选择性杀伤多种肿瘤细胞的特性。这种在海南蚊虫上发现的病毒，只在马和猪之间传播，但被团队证实，可以钻入癌细胞体内，通过扩增裂解方式杀伤肿瘤细胞，“以毒攻毒”。

颜光美团队在小鼠和人体肿瘤组织上进行的实验显示，M1 对肝癌、结直肠癌、膀胱癌细胞的杀伤作用最明显，对黑色素瘤、脑癌和前列腺癌等癌细胞也起作用。实验发现，M1 病毒对体外培养的部分人类癌症细胞，抑制率高达 90%；对肿瘤模型小鼠体内的癌细胞，抑制率达 50%-60%。他们还对临床病例中切除下来的肿瘤组织进行实验发现，对敏感病例的癌组织的抑制率达 60%-70%。所谓抑制率，指的是 M1 病毒杀死肿瘤或抑制肿瘤增殖的比率。论文发表在 2014 年 10 月 2 日的《美国国家科学院院刊》上，经国内媒体报道后，引起轰动。

又是三年，颜光美说，自 2014 年研究被报道伊始，每个星期，都有患者发来邮件，希望使用病毒制剂，或是询问研究进度。来自齐齐哈尔的一家四口人，甚至直接登门拜访。颜光美尽量一一回复，“我很理解，亲人得了癌症，是什么样的心情。人的精神向往会产生很大的作用，有了期待，也许病人就能等到那一天。”

除了患者，这项研究也得到了省领导的关注。溶瘤病毒 M1 的临床转化研究，还获得国家“十三五”重大新药创制科技重大专项资金的支持。在这些支持下，溶瘤病毒 M1 将可能享受绿色通道以更快的速度进入临床试验。现阶段，颜光美教授课题组正在紧锣密鼓地进行新药申报前的临床前研究，他说，有望 2018 年申请临床试验批件，正式进入临床试验阶段，届时，部分受试患者就能最先注射到这一药物。

抗癌新药研发已走了一半

“最终疗效要用临床说话”

“整个研究还算顺利，除了睡着的几个小时没考虑(这项研究)，其他时间都在考虑。”今年颜光美已有 60 岁，因为年龄原因，他退出了中山大学副校长这一领导岗位，有媒体希望专访他，被拒绝了。“我说自己主要的兴趣在研究上，如果有了科研进展，我会跟大家沟通。”

获得了众多关注的目光，让颜光美更加珍惜时间，退下来后，颜光美一天都没休息过。团队的成员凌晨一两点，可能也会接到他的微信。但颜光美很欣喜，因为现在精力很集中，“100% 花在研究工作上，这两三月研究的进展特别快，这是我特别觉得高兴的事情。如果有机会做成新药，那是非常幸运的。”

这几年来的科研进展和技术突破，让颜光美充满信心，如果把研发抗癌新药的过程比作 10 公里长跑，2014 年，颜光美接受南都记者采访时认为，团队才顺利跑完了第一公里，而现在，“比较稳健地说，已经走完一半了。感觉已经没有跨不过去的技术门槛，做成了不是问题，没做成功那才是问题。”

但对于将来药物临床使用可能达到的效果，颜光美始终持审慎态度，“最终一定要用临床治疗来说话，现在动物试验做得再漂亮，也只是动物试验，一定要病人试了才知道，如果再往前讲，就过线了。”但颜光美认为，该药物研发最低的要求、最基本的期待是“延长肿瘤患者的生存期”。

揭秘

A

一年多住在猴厂 不定期给食蟹猴注射 M1

自然界存在的病毒中，只有一小部分会让人体致病。团队通过体外细胞系和小动物模型上证实，M1 病毒虽然可以攻破肿瘤的防线，但对正常细胞并没有损伤作用。

但病毒是否会对人体有毒副作用？在 2014 年成果公布后，团队紧锣密鼓挑选了“最接近人类”的非人灵长类动物食蟹猴进行验证。团队成员、中山大学副教授胡骏在肇庆找到了合适的实验猴厂，这里既能给猴子做 B 超，还能做 CT、核磁共振(MRI)，“广州医院也有核磁共振，但猴子去做肯定不方便。”

接下来的两年里，胡骏有一半时间就住在山上的猴厂，不定期地给食蟹猴静脉注射了 18 次溶瘤病毒 M1，密切记录食蟹猴的日常行为表现、生化指标和重要器官的影像结果。“在这个过程中，每天也提心吊胆，每次检查结果出来就赶紧去看。”胡骏说。数据结果让人欣喜：在观察的半年时间内，食蟹猴都没有出现任何不良临床反应，核磁共振检查也未发现任何器官出现损害。

为什么是 18 次？颜光美说，因为怕反复注射引起人体过敏反应等副作用，因此在食蟹猴身上注射了多次，“如果一个疗程使用 6 次，那我们打 18 次，看会不会有影响。”“在猴子身上是安全的，在人身上有很大的机会也是安全的。这个结果强烈提示，M1 病毒具有良好的安全性，为将来 M 1 病毒在临床的应用提供了保障。”颜光美说。这一成果也于 2016 年 6 月 22 日，发表在基因治疗领域的权威期刊《人类基因治疗》。

B

M1 病毒使用增效剂后 抗肿瘤活性提高 3600 倍

除了验证 M1 病毒的安全性，颜光美也在考虑另一个问题：抗癌药物研发已有 200 年历史，针对各种癌症的药物达数百种之多，知识有一个继承关系，M1 病毒和现有的抗癌药物有无协同作用？为此，团队的博士张海鹏带领另外三位博士，挑选了 350 种有代表性的小分子靶向药物，筛选了 8 个月。

在对比后，张海鹏等人逐渐缩小范围，并定格到一类靶向内质网相关降解通路 (ERAD) 的抗癌药物，它适用于多发性骨髓瘤和多种晚期实体瘤。课题组在小鼠的肝脏上注射人肝癌细胞，建立了原位肝癌模型，并对小鼠注射低剂量的溶瘤病毒和 ERAD 抑制剂，结果显示，小鼠的生存期延长了一倍以上。单独使用低剂量 M 1 病毒攻击，肿瘤模型小鼠体内的癌细胞，抑制率为 23.6%。而在用了增效剂后，抑制率提高至 72.3%。

临床肿瘤手术标本的离体培养组织上，这一联合应用的效果也得到验证。并且，此联合疗法在食蟹猴模型上没有引起不良反应。不止如此。这一抗癌药物能显著增强 M1 病毒的抗肿瘤活性，增幅高达 3600 倍。“比如，以前用 1 个病毒可以杀伤 1 个肿瘤细胞，现在能杀伤 3600 个。”“溶瘤病毒 M1 是自动锁定肿瘤细胞的制导导弹，而 ERAD 抑制剂的加入，如同在导弹上绑定了自带筛选功能的烈性炸药包，强强联手，效果不言自明。”颜光美说，这也给研究带来了新思路，病毒 M1 除了“单打独斗”外，也可以和别的药物联用提高疗效。

有意思的是，两种药物是否应该搭配应用于病人，“有据可循”。“通过检测 ERAD 通路中一个叫做 VCP 的蛋白质来预测。”张海鹏解释，具体来说，如果肿瘤组织上的 VCP 蛋白高表达，提示病人适合溶瘤病毒 M1 和 ERAD 抑制剂联合方案，如若低表达，则代表不适合。让人兴奋的是，在肝癌病人中，肿瘤组织高表达 VCP 是很常见的。该治疗方案将给难治的肝癌带来新希望。但张海鹏说，不只是肝癌，该方案对膀胱癌、结直肠癌也有显著的增效作用，“不同的肿瘤或许可以筛选出不同的增效剂。”这一研究成果也在 2017 年 8 月 24 日凌晨发表在国际上转化医学领域的权威期刊《科学·转化医学》。

C

溶瘤病毒 M1 可以 引发肿瘤细胞“内斗”

在研究过程中，团队博士生蔡静偶然的新发现，破解了另一谜题。在一次做实验时，蔡静用标记上红色荧光的 M1 病毒感染肿瘤细胞，感染后，如果细胞带有红色标记，说明感染上了病毒。随后，她对肿瘤细胞进行“凋亡染色”，发现一个有意思的现象：被感染的肿瘤细胞周围，有很多旁边的肿瘤细胞没有红色标记，即没有感染 M 1 病毒，但也发生了死亡。

是谁杀死了这些旁边的肿瘤细胞？随后的两年多时间里，蔡静专注破解这一难题。最终她发现，M1 病毒居然可以诱导肿瘤细胞，释放具有细胞毒性的因子，进而杀伤这些细胞周围尚未感染 M 1 的肿瘤细胞。这是一种非常有趣的现象，学术界称之为“旁观者效应”，意为处于感染细胞周围的旁观细胞遭受杀灭。

而且，实验发现，30% 癌细胞是被 M 1 病毒杀死的，而剩下的 70%，均是被癌细胞放出的因子杀死的。颜光美如是解析这一现象：病毒要在活细胞里生存，如果试着从肿瘤细胞的角度来理解这种行为，可以发现，肿瘤细胞在受到溶瘤病毒胁迫时，似乎抱着一种“断臂求生”的心态释放信号，杀灭周围的细胞，让病毒无法靠近，以保全远端的肿瘤细胞。这一创新性的成果，于 2017 年 6 月 27 日发表在国际上具有很高影响力的权威期刊《美国国家科学院院刊》。

释疑

新药离上市还有多久？

已制备注射制剂，上市时间尚无法预估

按照法律规定，新药研发需通过科学研究，临床前，用于人体的一、二、三期临床试验等阶段，才可以上市销售，用于临床治疗患者。一期临床试验考查药物的安全性，二期考查药物的有效性，三期试验用数量更多的实验样本进一步研究，上市后还要在临床中进行大规模的研究，验证药效。

颜光美说，目前，团队研发药物的工艺技术难题已经解决，M1 病毒经过发酵、纯化的步骤后，最后将制成冻干粉，成为静脉注射的制剂。国际上现行使用的溶瘤病毒注射液，需要将溶液冷冻到负 80℃，运输受到限制。而制成冻干粉，可以放置在 2℃-8℃环境当中，普通冰箱即可保存，使用很方便。颜光美说，药物纯化是极为艰难的步骤，不少研发药物走到这一步后，止步不前。“打通了这个技术关节，我扎扎实实高兴了好几天。”

目前，团队正在进行新药申报前的临床前研究，预计 2018 年可以进行 M1 病毒的临床试验，届时，药物将可在病人身上进行首试。“做完一期试验，最快需要一年时间。”颜光美说，新药审批需要多长时间，“这不是我能决定的，时间还没办法预估。”

病毒是否对所有肿瘤有效果？

11 种癌症均有不同抑制效果

颜光美说，今年 3 月，美国 FDA 批了一类抗癌生物标志物，如果多种癌症都具有这个生物标志物的话，则可被批准治疗。“这是未来抗癌药物发展的新方向，这就是我们计划做的。”

目前研究显示，溶瘤病毒 M1 对 10 种高发癌症(肺癌，肝癌，结直肠癌，乳腺癌，胰腺癌，前列腺癌，宫颈癌，胶质瘤，鼻咽癌，胃癌)，以及广东高发的鼻咽癌都有不同程度的抑制作用。

此前，该团队已找到 M1 病毒靶向杀伤癌细胞的特征物———锌指抗病毒蛋白(ZAP)。目前，针对 ZAP 的诊断试剂盒已在报批，VCP 的诊断试剂盒已准备委托公司研发。

如若新药成功研发，这 11 种肿瘤病人可以先通过检测，确定体内癌细胞缺乏 ZAP，便可以进行溶瘤病毒 M1 治疗。如果 VCP 蛋白高表达，病人则适合溶瘤病毒 M1 和 ERAD 抑制剂联合方案。

背景

M1 病毒曾被封存 40 年

M1 病毒的发现可以追溯至上世纪 60 年代。1964 年，一群科学家在海南岛“抓获”了 50 只蚊子，从这些蚊子体内，他们分离出了这种病毒。他们发现，M1 除了在马和猪身上会引起非常轻微的类似感冒的症状，对人和绝大多数动物都几乎没有致病性。于是，这群科学家对 M1 丧失了兴趣，病毒被封存。

2004 年，当时正在做博士论文的胡骏在一次实验中偶然发现，M1 病毒可以将大鼠来源的胶质瘤细胞溶解掉。

2009 年，在《细胞周期》(Cell Cycle)上，颜光美与胡骏发表了论文，报告了他们在 M1 病毒身上的新发现———这种病毒在体外试验中能够杀灭癌细胞。2014 年发表在《美国国家科学院院刊》上的论文，经国内媒体报道后，引起轰动。

溶瘤病毒是一类具有复制能力的肿瘤杀伤型病毒，M1 病毒也是其中之一。近几十年来，溶瘤病毒治疗引起了广泛关注。世界上最早关于溶瘤病毒的报道出现在上世纪 50 年代，当时发现一名子宫颈癌患者在感染狂犬病病毒后，肿瘤随之消退。

几十年间，溶瘤病毒在美国得到重视和大量研究，美国 Amgen 公司的溶瘤病毒免疫治疗药物 T -Vec 已经上市。

“研究也提示其他溶瘤病毒，可以试着跟肿瘤药物联用，进行增效。”颜光美说。