重组表达小鼠MIP-1α和B7-1基因的慢病毒载体的构建及鉴定

来源:《中国比较医学杂志》2012年第1期 发布时间:2012年12月04日 浏览次数: 【字体: 收藏 打印文章

     摘要:本文目的是构建重组表达小鼠MIP-1α和B7-1基因的慢病毒载体,为淋巴瘤基因治疗的实验研究奠定基础。其方法是设计引物扩增获得目的基因小鼠MIP-1α和B7-1基因的全长编码序列cDNA,将目的基因与经酶切线性化的慢病毒载体进行定向连接,其产物转化感受态细胞,对长出的阳性克隆进行PCR鉴定和直接测序序列分析.MIP-1α和B7-1目的基因质粒转染293T细胞,观察绿色荧光蛋白(GFP)表达,采用Western Blot法检测其蛋白表达,实时荧光定量PCR,检测慢病毒浓缩液的滴度。结果成功构建了重组表达小鼠MIP-1α和B7-1基因的慢病毒载体,实时荧光定量PCR证实MIP-1α、B7-1基因重组慢病毒载体的滴度均达2.00E+8 TU/mL。结论 本研究成功构建并包装出高滴度的小鼠MIP-1α和B7-1基因重组慢病毒载体,为淋巴瘤基因治疗的实验研究奠定了基础。

    作者:刘伟;余英豪;

    作者单位:中国人民解放军南京军区福州总医院病理科

    全文阅读:《中国比较医学杂志》2012年第1期 http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zgsydwxzz201201013.aspx

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