运输小鼠遗传物质较活体运输有伦理优势且更加便利，保障动物福利的同时也避免活体动物运输相关的复杂的法规。目前运输小鼠遗传物质多选择在-196℃液氮中。由于冷冻保存和复苏技术的创新，精子冷冻正在成为一种更为方便的选择。此外，冷冻的精子对冷冻后温度的波动也较不敏感。

这篇文章证明冷冻精子可以安全的在干冰（-79℃）中储存至少七天，实验已经得到多个实验室的验证。另外，精子在干冰运输后可以返回液氮中长期储存，没有明显的影响。

实验1：六个品系小鼠精子的短暂储存（-80℃ 7天）

C57BL/6J，C57BL/6N，FVB/NJ，BALB/c，129/SvJ和CD1的野生型精子在-80℃下储存7天后IVF结果如图1A，结果显示，对比在液氮中保存的精子（C组），不论使用哪种冷冻方法（CPM，gCPA或CPA），精子可以在-80℃下储存至少7天（A组），而不会显著丧失受精能力。

图1

此外，结果表明，在-80℃储存至少7天的精子可以返回到液氮中储存（B组），而不会显著损失受精力。统计分析表明，只有“冷冻方法”和“品系背景”对IVF有显着性影响，而保存介质、保存温度无明显影响。另一方面，已经知道受精率是取决于所使用的小鼠品系的遗传背景。例如，129/SvJ精子用CPA方法受精率最低（10％±1％介于A组和C组之间）而C57BL/6N精子（A，B和C组）不管使用哪种冷冻方法受精率总是为60％。这些结果还证实CPA法是所有测试中精子冷冻/复苏效率最低的。图1B表明-80℃和液氮存储的精子复苏IVF后胚胎移植获得的后代在数量上没有显著差异。同样的，从-80℃再返回液氮冷冻的精子与以上两组也没显著差异。所有遗传背景和冷冻法都是如此。例如，C57BL/6N用gCPA方法冷冻精子获得的胚胎在所有实验组中得到了类似的数据：C组为55.40％±1.3％，A组为54.35％±2.5％，B组为55.90％±1.8％。

胚胎移植后的生仔率范围从最小值26.96％（CPA法精子冷冻近交系129/SvJ）到最大值72.20％（gCPA法精子冷冻远交系CD1），这个结果与平时数据一致。

实验2：转基因小鼠精子的短暂储存（-80℃ 7天）

实验2与实验1操作一致，除了精子的品系来源不同。在-80℃中储存7天后IVF结果（二细胞胚胎/卵母细胞百分比）如图2所示。结果显示，不论使用哪种方法（CPM，gCPA或者CPA）冷冻转基因鼠精子都可以在-80℃储存至少7天（A组），并且对比C组，再次返回液氮冷冻（B组）没有明显损失受精潜力，我们也没有观察到样品储存与其他因素之间有任何相互作用，如冷冻方法，基因和遗传背景。

在-80℃下储存的精子不会影响胚胎的发育和产仔能力，生仔率取决于品系背景，基因和冷冻方法。对于每一次的胚胎移植，三组之间的生仔率没有明显的差异，数据见图2B。

图2

实验3：模拟运输：对比在-80℃超低温冰箱和干冰中储存7天的精子

CPM方法冷冻的转基因小鼠（C57BL/6N和C57BL/6J背景）的精子在超低温冰箱（-80℃）、干冰（-79℃）中储存7天，TVF结果如图3A所示。对于每个遗传背景，不同组之间没有显著差异。结果表明，冷冻精子可以在-80℃超低温冰箱或在-79℃的干冰中储存七天，而不会显著改变受精力。所有实验组中俩个品系背景有百分之五十或者更多的胚胎移植生仔（图3B）。再次证实处理本身和品系背景的相互作用对IVF和移植生仔率没有显著影响。

图3

实验4：运输转基因精子

精子样本（含C57BL/6N 背景的3个转基因和C57BL/6J背景的3个转基因）用CPM和gCPA冷冻，使用干冰运输两根麦管，图4A中显示多个实验室研究的结果，转基因的受精率在37.2% （CPM法EM03992基因）到79.4%（CPM法EM02571基因 ）之间，每一个实验室都从IVF中获得二细胞胚胎。这些胚胎移植进雌鼠体内后，雌鼠有很高的生仔率，如图4B所示。实验证明了不论冷冻方法和品系背景，各实验室之间差异都很小，精子可以在干冰中运输至少三天而不丧失受精能力。

图4