一、心脏超声功能评价

心脏超声功能评价使用迈瑞M7Vet便携式彩色多普勒超声诊断系统（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）配置的P7-3s相控阵心脏探头（3-7MHz）评价心脏功能。动物超声时使用氯胺酮6mg/kg麻醉保定。剔除胸部毛发后，在右侧肋间触摸到心脏跳动位置，涂抹超声导电胶，放置探头后获取B型超声，在获得四腔室图后，探头往心尖出，确认心梗点并获取M型图。假手术对照组在心室乳头肌后取M型图。

下图黄色箭头指示心梗区域。

二、心梗区域的病理组织取样和染色

心梗手术后4周开胸取心脏组织进行病理检查。猪麻醉固定后胸骨正中切口开胸，逐层分离暴露摘取心脏，用4℃生理盐水冲洗心脏，在线头结扎处往心尖处，肉眼可见颜色暗黑的室壁组织，判定为梗死区域，从梗死往正常鲜红过渡的区域判定为梗死边缘区，在组织颜色正常远离梗死区域的组织判定为非梗死区。 在左心室的非梗死区域和梗死区分别取多块1cm X1cm组织块，放入冻存管中，留待其它分析实验。组织福尔马林固定后切片，使用HE和Masson染色法对切片观察其病理学改变。

下图HE染色示典型梗死边缘区的组织变化。A. 显示所放大观察的区域；B. 局部放大图A，指示心肌纤维断裂溶解（箭头1）、中性粒细胞增多（箭头2）、结缔组织增生（箭头3）和出血现象（圆形示意）。C.中性粒细胞和出血现象（箭头2和圆形区域） 。 D. 成纤维细胞核（箭头4）和淋巴细胞（箭头5）。

三、RNA提取和基因芯片分析

使用TRIzol® Reagent（FisherScientific））试剂盒提取RNA后应用 NanoDrop ND-1000测定CyDye和RNA的浓度，以Cy5(Cy3)的标记效率达到每1000个核苷酸包含6染料分子为标准，达标后确定为可获得良好芯片杂交结果的样品。测定的总RNA起始量 为1.65微克，应用Agilent杂交程序。芯片为Bovine (v2) Gene Expression 4x44K Microarray（Agilent Technologies,USA）对心梗手术组的心梗边缘区的基因和假手术组的正常组织进行差异基因数目比照以确定差异表达基因，差异基因的筛选条件设定为绝对值差异大于200，差异倍数的计算公式为=(log2|Fold change| ≧1)/（信号校正常数）；随后对差异基因进行生物途径富集分析，用以评估可能因应激因素引起表达改变的生物信号转导和代谢途径。

下图为部分差异基因生物途径富集分析结果。

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