SD大鼠胚胎上胚层干细胞的分离与培养

来源:《第十三届中南地区实验动物科技交流会论文汇编》 发布时间:2013年11月14日 浏览次数: 【字体: 收藏 打印文章

    摘要: 目的 获取SD 大鼠胚胎中附植后的胚胎上胚层干细胞(post-implantation Epiblast stem cells,Episc),并对SD 大鼠Episc(SDEpisc)分离与培养具有影响的组织来源、胎龄、细胞因子等条件进行探讨, 从而探索适宜SD 大鼠Episcs 分离培养的实验体系,为下一步SD 大鼠Episcs 的建系提供实验研究基础。方法以昆明小鼠胚胎成纤维细胞为饲养层,分别取5.5 日胎龄的囊胚和7.75 日胎龄囊胚上胚层(Epiblast),于添加白血病抑制因子(leucocyte inbibitory factor, LIF)或活化素(activin)的基础培养基中,进行原代培养。传代培养则分别采用机械法和胰酶消化法对克隆集落进行。最后通过碱性磷酸酶染色对克隆集落进行鉴定分析,并检测其体外分化能力。结果 培养于LIF 培养基和activin培养基中的囊胚均发生严重分化。培养于LIF的培养基中的Epiblast也发生了严重的自发分化。而在activin培养基中,Epiblast形成SDEpisc原代集落。经机械法传代获得AKP染色阴性、能形成拟胚体的SDEpisc。结论 利用细胞因子activin,结合机械传代法可从7.75日胎龄SD 大鼠胚胎中获得SDEpisc。

    关键词:上胚层;多分化潜能;上胚层干细胞;活化素

    作者:邓新燕,杨景超,陆杰,郭中敏

    作者单位:中山大学实验动物中心,广州 510080;中山大学公共卫生学院,广州 510080

    全文阅读:见《第十三届中南地区实验动物科技交流会论文汇编》

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