人们常说“难啃的骨头”,在病理实验中,骨组织应该也算得上病理技术中难啃的骨头吧。
骨组织(osseoustissue)是一种坚硬的结缔组织,主要由细胞、纤维和基质构成的。纤维为骨胶纤维(和胶原纤维一样),基质含有大量的固体无机盐,相对于其他常规组织,骨的最大特点是细胞基质具有大量的钙盐沉积,成为很坚硬的组织,构成身体的骨骼系统。由于这种坚硬结构,病理切片时经常会使刀片感到磕牙,有时一不小心,不是“骨毁”,就是“刀亡”,所以不能按常规组织那样直接进行脱水切片,这也是在病理实验中骨组织不同于其他组织处理方法的重要原因。
下面我就给大家介绍一下骨组织前期处理吧。病理制片流程主要包括脱水、包埋、切片、染色和常规组织处理,不同的是骨组织在脱水之前要进行脱钙,目的就是让骨组织由坚硬变柔软,富有韧性,不“磕牙”,便于后续切片。
目前,骨组织的脱钙方法主要有以下几种:酸类脱钙法(包括有机酸脱钙、无机酸脱钙、混合酸脱钙其它酸类);电解脱钙法、 超声波脱钙法、 微波脱钙法;螯合剂(EDTA)脱钙法;离子交换树脂脱钙法,每种脱钙方法都有各自的利弊。目前运用较为广泛的脱钙方法主要是硝酸脱钙和EDTA脱钙。
硝酸脱钙法主要的优点是能够快速对组织进行脱钙,使细胞不会因为较长时间浸泡于脱钙液中发生肿胀,由于硝酸属于强酸,长时间脱钙会影响核染色,使细胞核着色浅,破坏细胞细微结构,也可引起组织膨胀,导致组织变形,所谓“心急吃不了热豆腐”就是这个道理。同时,对于一些特殊染色也会有比较大的影响,比如抗酒石酸酸性磷酸酶染色(即Trap染色,该染色可以将破骨细胞中的抗酒石酸酸性磷酸酶染成酒红色,主要用于显示骨组织中的破骨细胞),抗酒石酸酸性磷酸酶在酸性条件下易溶解,所以若用酸性脱钙液,则无法显示出破骨细胞,严重影响结果。
EDTA脱钙液较温和,脱钙效果较好,对组织的结构破坏较小,能有效保存一些酶类物质,对某些染色结果影响也较小,正好印证了“慢工出细活”,但脱钙时间比较长,且对脱钙液的PH要求比较高,基本控制在7.2到7.3左右。
所以根据实验需求选择合适的脱钙液是比较重要的。
骨头在人体中具有重要的作用,是整个人体关键的支撑物,随着年龄的增长,经常会出现骨质疏松等症状,虽然病理切片中需要多骨头进行脱钙,软化骨头,可对于人类来说,我们希望我们的支撑物更加强健、坚固,所以适当的补钙是十分必要的,同时注意多多晒太阳,促进钙的吸收哦。
下面我们就欣赏几张骨头的美照吧。
① HE
② Trap
③ 甲苯胺蓝
④ masson