CRISPR/Cas9系统介导Slc6a6基因敲除大鼠的繁殖与鉴定

来源:中国比较医学杂志2019年第5期 发布时间:2019年06月26日 浏览次数: 【字体: 收藏 打印文章

目的:利用CRISPR/Cas9技术构建牛磺酸转运体基因(solute carrier family 6 member 6,Slc6a6)敲除 大鼠,繁殖并鉴定,为研究牛磺酸缺失对神经系统疾病的影响提供稳定的大鼠模型。

方法:针对 Slc6a6基因第5 外显子,设计向导RNA(single-guide RNA,sgRNA)介导Cas9核酸酶与靶点DNA特异性结合,并切割基因组DNA, 被切割后的DNA进行重组修复,从而实现基因的敲除。 通过基因型鉴定和测序分析检测新生大鼠基因型。 利用 Real-time PCR、Western blot技术和免疫组化等方法,分析大鼠脑组织的牛磺酸转运体(taurine transporter,TauT)的 mRNA表达和蛋白表达,建立 Slc6a6 基因敲除大鼠模型。

结果:F3 代出现 21 只 Slc6a6 基因敲除纯合子 (TauT-/-),54只杂合子(TauT+/-),27只阴性(TauT+/+),F3 代纯合率约为20.59%,基本符合孟德尔遗传定律。 Slc6a6基因敲除纯合子大鼠脑组织mRNA水平基本不表达,TauT蛋白表达水平显著低于同窝阴性大鼠。

结论:本 研究利用CRISPR/Cas9系统定向敲除 Slc6a6基因,成功构建 Slc6a6基因敲除大鼠模型。

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