【操作步骤】选用雄性Wistar大鼠,体重180~220g,随机分组,正常饲料喂养,实验结束前用代谢笼收集并测24h尿量、24h尿草酸(Ox)的排出量(过氧化氢-盐酸苯肼法)。1%乙二醇(EG)饮水并0.5μg la-(OH)-Vit D3隔天灌胃,共饲养28d。麻醉牺牲大鼠,下腔静脉穿刺取血,3500转/分离心10min后,取上层血清检测BUN、Cr、P、Ca2+含量。切取双肾,纵向剖开,取左侧肾脏用10%中性福尔马林固定,作常规HE石蜡切片和von Kossa染色,偏光显微镜观察肾组织草酸钙结晶形态分布及肾组织的病理改变,原子吸收光谱仪进行肾组织Ca2+、Mg2+含量,尿总 Ca2+、总Mg2+含量测定。
【结果分析】人类尿路结石的大多数为含钙结石,而多数以草酸钙形式沉积于尿路。给予动物活性维生素D3,增加肠道钙离子的吸收,同时给予乙烯葡萄糖增加体内草酸的生成及促进尿的草酸排泄,从而造成草酸钙沉积于尿路形成结石。实验7d后,尿中草酸钙的排泄已明显增多,尿磷及尿镁的排泄量也开始明显增加。14d后血钙水平明显增高,血磷也有增高倾向,但血镁无明显变化。测定血尿素氮2周后开始升高,3周时升高明显,此时菊粉清除率也明显下降。4周后,肾脏肉眼观明显肿大,肾盂、肾盏有结石形成或肾皮髓交界处髓质部位及肾乳头部亦可见放射状的钙盐沉积。光镜下可见到肾小管明显扩张,并可观察到管腔中有无色透明的结晶样物质沉积;在偏光显微镜下正式观察到黄色的草酸盐结晶;使用yon Kossa染色可见在远端肾小管、集合管管腔内有黑色的钙盐沉积。
本实验是将目前国内外常用的单一和复合诱石剂诱导的实验性大鼠肾草酸钙结石模型进行了比较研究的结果,证实1%EG饮水+0.5μg1α-(OH)一VitD3隔天灌胃(4周)与1%EG饮水+2%乙酰半胱氨酸(AC)每只2ml每天灌胃(4周)诱导大鼠成石效果最显著、简便、稳定。