目的 构建淋巴细胞活化基因 ̄3(Lag ̄3)基因敲除小鼠,初步分析 Lag ̄3基因敲除对小鼠表型影响, 为后续Lag ̄3体内功能研究提供动物模型。
方法 利用CRISPR/Cas9技术结合受精卵显微注射构建敲除小鼠,通 过分子鉴定筛选基因敲除阳性小鼠,利用RT ̄PCR和流式检测方法进一步验证 Lag ̄3基因敲除小鼠体内 Lag ̄3基因敲除效果,通过建立ConA诱导的肝损伤模型研究 Lag ̄3基因在体内的功能。
结果 PCR和产物测序结果显示,获得了exon2缺失的 Lag ̄3基因敲除小鼠,该基因敲除纯合子小鼠(Lag ̄3-/-)经刀豆蛋白(ConA)刺激后,小鼠心脏、脾、肺、巨噬细胞和淋巴结中仅能检测到Lag ̄3mRNA本底表达信号,小鼠巨噬细胞、脾细胞和淋巴结中仅能检测到非常低数量的Lag ̄3阳性细胞,表型分析发现,Lag ̄3基因的缺失显著减少了ConA诱导的小鼠外周血、骨髓和脾CD3+T细胞的数量,减轻了ConA诱发的急性肝损伤情况。
结论 成功构建 Lag ̄3基因敲除小鼠模型,肝损伤过程中的体内功能研究显示,Lag ̄3缺失可以显著缓解ConA引发的肝损伤的发生。
阅读原文:淋巴细胞活化基因 ̄3敲除(Lag ̄3)小鼠构建及初步表型分析.pdf