目的    构建可诱导Tet1CD过表达的稳转细胞系,探究Tet1蛋白对细胞增殖、周期及凋亡的影响。 

方法    构建重组质粒 pTRE-Tight_Tet1CD_IRES_RFP_RPBSA_M2rtTA_Puro,然后与表达转座酶的“睡美人”质粒通过脂质体法共同转染到 HEK 293T 细胞,通过嘌呤霉素筛选和多西环素诱导构建诱导表达型的 Tet1CD 稳转细胞系 293T(Tet1CD)。 通过 Western blot 检测 Tet1 蛋白的表达;通过 DNA dot blot 检测细胞基因组中 5hmC 的含量,通过流式细胞术检测 Tet1CD 蛋白对细胞周期和凋亡的影响;通过细胞计数检测 Tet1CD 蛋白对细胞增殖的影响。 

结果   成功建立了可诱导 Tet1CD 过表达的 HEK293T 细胞系293T(Tet1CD);Western blot结果显示诱导后细胞内 Tet1CD 蛋白表达上升;DNA dot blot 结果显示过表达 Tet1CD 蛋白细胞内 5hmC 含量升高;流式细胞术结果显示, Tet1CD 过表达促进了细胞凋亡(P<0. 05)及增加 G2 时期细胞比例(P<0. 05);细胞计数结果显示,Tet1CD 过表达抑制细胞增殖(P<0. 0001)。 

结论    Tet1 蛋白可能通过促进细胞凋亡及阻滞细胞周期最终抑制细胞增殖。

阅读原文：Tet1 蛋白对 HEK293T 细胞增殖、周期及凋亡的影响.pdf