提起细胞培养，众多小伙伴都倍感头大。劳心费神只愿他们长得漂漂亮亮的，奈何现实总是充满种种意外，稍不留神，细胞不是染菌了就是活力不好......赛业OriCell细胞学院交流群的小伙伴们，就经常遇到这些问题。

正所谓漂亮的细胞总是相似的，而狗带的细胞各有各的精彩。正逢一年一度的赛业OriCell第三届细胞培养图片大赛，我们征集了群里小伙伴们的建议，这次的比赛不仅比谁养得细胞更漂亮，还比谁养细胞更惨，让大家从成功和失败正反双面总结细胞培养的经验教训。快来参加“OriCell第三届细胞培养图片大赛”吧，在分享经验造福广大科研汪的同时，还可以赢得心动大奖。

如何报名

您在养细胞的路上总有或多或少的心得体会，分享一下您培养细胞成功或失败的经验，就有机会赢得心动大奖哦！快扫描下方二维码报名参加吧！

 奖品

大赛日程

投稿时间：2020年11月3日—2020年11月15日

初选时间：2020年11月16日—2020年11月17日

投票时间：2020年11月18日—2020年11月30日

获奖公示：2020年12月2日 

评选规则

1. 初选：主办方将组织专业的评审委员对提交的参赛作品进行初选，根据作品的“艺术性”、“科学性”、“清晰度”评选出40张入选作品，漂亮组和悲催组各20张；

2. 投票：入选的40张作品将会在网页展示并进行为期十二天的投票（每人只可投一次），每一票记一分。使用恶意软件刷票者视为自动弃权。

3. 终选：投票分数×40%+评审分数×60%（评审分数为100分制，其中艺术性占50分，科学性占50分），按分数高低甄选出一二三等奖。 

作品示例

姓名： 李萌

作品名称：最丑小丑鱼

作品描述：此细胞图片来自于45天的血管类器官与87天的大脑类器官的融合，这是一次创新性的尝试，血管的成功融合可以为大脑类器官提供更丰富的营养，帮助其运输营养物质到3D球体内部，类器官体积和结构更大更复杂。人源胚胎干细胞经过定向诱导、在血管类器官13天大脑类器官55天时用胶体包被在一起、之后再成熟培养从而逐渐长的3D细胞球。血管类器官采用前沿文献发表的血管分化培养方法培养至13天再融合。在生长过程中它们逐渐融合，呈现出两种细胞混合的形状。这是通过切片、免疫荧光染色、共聚焦显微镜拍摄得到清晰而结构分明的图片。图中蓝色为DAPI染色得到的细胞核形态，颗粒分明，外侧显示更加清晰明亮；红色是Ki67，反 映细胞增殖状况，绿色为caspase-3反应细胞凋亡状况。该图片拍摄的是融合类器官整体的形貌，从图中可以看到，融合类器官增殖旺盛，而凋亡较少，仅在空泡处出现凋亡情况。 

赛业专家们的小建议

A. 复苏小妙招

复苏过程非常关键，直接影响这一株细胞的生长状态和传代能力。一般而言，复苏就是将细胞株从液氮中拿出来后立刻放入-80°C冰箱数分钟，待液氮挥发后迅速放入37℃振荡水浴，俗称“快融”过程，这一过程就是尽快融解细胞内的冰晶，减少对细胞的损伤。下一步就是将细胞放入培养基，一种方法是直接加入到培养基，待第二天细胞贴壁后更换新鲜的培养基；第二种方法是加入数倍体积的培养基混匀后，低速离心去掉对细胞有毒害作用的DMSO，然后把细胞接种到培养皿中。 

B. 消化过程注意事项

消化过程会破坏细胞表面蛋白，从而影响细胞状态。目前使用较多的操作是，吸走培养基后先用PBS洗1-2遍，然后加入胰酶进行消化，消化到细胞变圆、少量细胞脱落即可加入培养基进行终止。接下来是离心，除去上清。加入适量培养基将细胞吹匀，再转移到培养皿的过程也很关键。吹打过程中用力要适度，既要避免用力过小细胞未分散，又要避免用力过大细胞悬液沾黏管壁造成损失，还要避免吹打过多机械剪切力伤害细胞。接种细胞后要适度摇晃培养容器，让细胞分布均匀。对于接种的细胞，在空间允许的条件下，尽量平放不要堆着放。此外，关培养箱时需尽量轻柔，有时候细胞出现同心圆分布的情况，就是由于关门太用力，导致培养基晃动，形成纹路。 

C. 冻存注意事项

一般情况下，冻存的细胞越多越好。培养中的细胞，建议在细胞状态好、增殖迅速时就冻存一些，而不是养过很多代用不完再冻存。细胞消化离心去上清后加入细胞无蛋白非程序冻存液调整密度到1×106 cell/mL，然后转入冻存管，直接放入-80℃冷冻过夜，注意冻存管摆放不能过于密集，以免处于内部位置的细胞冻存效果差。冻存完成后转入液氮中长期保存。细胞不要长期保存在-80℃冰箱，以免活力下降。 

D. 其他注意事项

除上述的主要操作步骤以外，常用的试剂存储也很重要。FBS正常存储温度是-20℃，在要使用之前先放到4℃融化，如果放到室温或者水浴锅中融解，血清中的蛋白会大量析出从而影响培养效果。另外胰酶需尽量分装保存，胰酶在室温下失活很快，近期用的放在4℃，其他就存储在-20℃。最后就是细胞需要及时传代和换液，通常为2-3天一次。过于频繁会影响细胞生成长微环境，间隔过长则会有营养匮乏、酸碱度失衡等问题。