目的    探讨细胞液泡分选蛋白4B(VPS4B)对人牙髓干细胞(hDPSCs)成牙本质分化及Notch通路的影响。

方法    hDPSCs分正常组、矿化组、阴性对照组、VPS4B-siRNA组,除正常组(正常培养,不做任何处理)外, 其余各组添加矿化液(0.785g/L地塞米松、0.05g/L维生素、2.16 g/Lβ-甘油磷酸钠),同时阴性对照组和VPS4B- siRNA组均用脂质体 Lipofectamine 2000分别和阴性对照siRNA、VPS4B-siRNA共转染。 CCK8 检测细胞增殖情况; 蛋白免疫印迹检测细胞中VPS4B、Notch受体释放其胞内结构域(NICD)、hairy相关转录因子 1(Hey1)蛋白水平;茜 素红染色观察细胞矿化情况;钙浓度检测试剂盒检测细胞钙浓度;实时荧光定量PCR检测细胞 Runx2、骨桥蛋白 (OPN)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)mRNA 水平。

结果    正常组茜素红染色较浅,面积较小;矿化组、阴性对照组染色较深,且面积较大;VPS4B-siRNA组染色颜色有所减轻,面积减少。 与正常组相比,矿化组、阴性对照组 OD450水平, NICD、Hey1 蛋白水平降低(P<0. 05),矿化结节相对数量,VPS4B 蛋白水平,钙浓度,Runx2、OPN、DSPP mRNA 水平升高(P<0. 05);VPS4B-siRNA 组矿化结节相对数量,OPN、DSPP mRNA 水平升高(P<0. 05);OD450水平,NICD、Hey1 蛋白水平降低(P<0. 05)。 分别与矿化组、阴性对照组相比,VPS4B-siRNA 组 NICD、Hey1 蛋白水平升高(P<0. 05); OD450水平,VPS4B 蛋白水平,矿化结节相对数量,钙浓度,Runx2、OPN、DSPP mRNA 水平降低(P<0. 05)。

结论    干扰VPS4B后可抑制hDPSCs牙本质分化,并初步探究可能是通过激活Notch通路实现的。

阅读原文：VPS4B调控Notch通路对促进牙髓干细胞成牙本质分化的机制研究.pdf