一、选种
1.性别鉴定
用拇指和食指把生殖器附近的皮肤扒开,雄兔即可见到一圆孔中露出圆锥形稍向下弯曲的阴茎(幼兔看不到明显的阴茎,只见圆孔中有凸起物)。天热时,雄兔睾丸可离开腹腔进到耻骨联合两侧的阴囊内。雌兔此处则为一条朝向尾巴的长缝,呈椭圆形的间隙,间隙越向下越窄,此即为阴道开口处。雌性动物有乳头8~12个。
2.年龄鉴定
一般根据动物的体重生长曲线来鉴定(表14-1)。注意动物的环境条件和营养状态会对体重产生影响。
家兔的年龄也可根据某些生理特征来鉴定。例如,仔兔出生时全身裸露,眼睛紧闭,耳闭塞无孔,趾趾相连,不能自由活动,出生后3~4天即开始长毛,4~8日龄脚趾分开,6~8天耳朵根内出现小孔与外界相通,10~12天睁眼,出巢活动并随母兔试吃饲料,21天左右即能正常吃料,30天左右被毛形成。家兔年龄还可通过观察指爪和牙齿的颜色及生长情况来判断。白色幼兔指爪呈白色,爪根部呈粉红色,隐在脚毛中,随着年龄增大而逐渐露出脚毛外。1年龄家兔的指爪红色与白色长度相等,1年龄以下红多于白,1年龄以上白多于红。老年家兔的指爪长而弯曲、色黄。家兔的牙齿也可作为年龄判定的一个指标。门齿随年龄而增长,幼龄兔牙齿洁白、短小、整齐,老龄兔门齿厚长而色泽暗黄。
3.健康要求
健康家兔应双耳竖立,耳静脉明显。眼睛有神,没有分泌物。体格丰满,肥胖适中。肛门干净,无稀便。被毛光泽,紧贴身体,不脱毛。鼻孔干净,无分泌物,呼吸声正常,不打喷嚏。门齿整齐,不流涎。运动活泼,反应灵敏。生殖器无溃疡。体表无伤口。
作为种用动物,外观上要健康,发育正常,有异常或有畸形的动物不能作种子用。
4.交配时的注意事项
用于交配的种兔,必须全部编上个体号码,进行档案式管理。用于交配的雄兔,要把交配日期和个体号码同时记在交配卡上。雄兔的交配号,由交配顺序从001编到999号。雌兔与雄兔交配时,雌兔可不再编号,仅记录交配的雄兔编号、胎次数、交配日期、产仔数、断奶数等繁育指标。雌兔的胎次数一般控制在6胎以内,超过胎次数或繁育性能不良的种兔及时淘汰,补充新的种兔。
5.选种
必须以世代优质家兔的生产作为基础,同时还应根据品系的表型特征慎重地进行选种。选种一般从第2胎至第4胎中选取后备种用兔,原则上从一窝中选取发育较好、体格健壮,并符合品系特征的动物作为备用种兔。备用种兔应记录品系、组、编号、性别、只数和出生年日期,并把记录卡挂在饲育笼上,同时记录在系谱档案中。另外,选种时需考虑到基因多态性的维持或控制近交系数的上升,因此,每次选种时,备用种兔(尤其是雄兔)需来自不同的繁殖组,且数量每组基本相同。
6.种兔的育成
选作留种的仔兔,离乳1月内每笼饲养5只以下,2月龄以后每笼饲养2只,作为种用交配后,每笼饲养1只。在饲育过程中,发现健康问题、出现畸形或其他异常者,应及时淘汰。
二、保种
1.保种方法
常用实验用家兔基本为远交群或封闭群。为了保证其群体遗传基因的多态性和个体间遗传性状的一致性,按照实验动物国家标准GB 14923-2010的要求,宜采用完全循环交配方法进行保种和扩群饲养。核心群的种兔数至少保持30只以上,其中雄兔数量不少于10只,雌兔数量不少于20只,并以种雄兔为核心将种群分成5组(A~E组),群体较大的种群可分成8组(A~H组)或以上组成环型交配方式(图14-2),以减少杂合子递减比例,防止出现近亲配种或近交系数的上升。
2.系谱记录方式
0代(N?+0)记录方法:A01,A02,A03,B01……
1代(N?+1)记录方法:A11,A12,A13,B11……
2代(N?+2)记录方法:A21,A22,A23,B21……
注:?为引进时的原始代数。
三、繁殖方法
1.性成熟与适配年龄
家兔性成熟以雄兔睾丸中产生具有受精能力的精子,雌兔卵巢中能排出成熟的卵子为依据。性成熟的早晚及初配年龄,取决于品种、性别、营养及各种环境因素的影响。在一般情况下,大型品种的性成熟5~6个月,中型品种4~5个月,小型品种3~4个月,雌兔的性成熟较雄兔早些。家兔的初配月龄,大型品种为7~8个月,中型品种为6~7个月,小型品种为5~6个月。品种间的性成熟与适配年龄也有一定的差异,新西兰白兔性成熟年龄为4~6月龄,适配年龄为5.5~6.5月龄;日本大耳白兔分别为4~5月龄和6~7月龄;青紫蓝兔则分别为4~6月龄和7~8月龄。
2.性周期与适配时机
雌兔在一个月里可发情2~3次。发情周期为8~15天,发情持续期为3~5天,个别的可能长达5天以上,在此期间配种较为顺利。雌兔发情后,举动不安,食欲下降,开始时,外阴黏膜呈潮红色,到发情旺盛时,变成老红色,发情后期则又变成紫红色。当其外阴部呈老红色时进行交配则受孕率最高。
3.交配方法
(1)自然交配法:即把雌雄兔混养在一起自由交配。这种方法简单及时,并能防止漏配和节省人力,但缺点较多,雄兔整天追逐雌兔交配,体力消耗过大,精液品质低劣,受孕率与产仔率低,且易衰老,所生仔兔体质差,抗病力低,容易传染疫病,影响兔群安全。因此这种配种方式一般较少使用。
(2)人工辅助交配法:雄兔和雌兔分笼饲养管理条件下,在雌兔发情期间,人为地把发情雌兔放入雄兔笼内进行交配。方法是:在雌雄兔配种之前,首先检查其健康状况和发情表现,若雌兔发情良好,正值交配时机,可按配种计划,把雌兔放入雄兔笼内配种。交配后,再经1~2min从笼内取出,倒置兔并在臀部处轻拍几下,然后把雌兔送回原笼,并将雌雄兔耳号及交配日期等详细登记在配种卡上。为了提高雌兔的受孕率和产仔率,可在雌兔配种之后隔10~12h再复配一次。
(3)人工授精:人工授精是兔繁殖改良最经济、最科学的方法。它可提高优良种雄兔的配种效率,保证精液的质量,提高受孕率和产仔率,杜绝生殖器官疾病的传播,也便于开展生殖工程和胚胎工程方面的科学研究。具体方法是:用假阴道采取品质精良的雄兔的精液,经显微镜检查,若精子活动好,密度大可用7%的葡萄糖稀释液作2~3倍稀释,然后用一截15cm长的人用导尿管,经灭菌消毒稀释液冲洗后,吸取稀释好的精液,将导尿管插入发情雌兔的阴道内4~5cm处,慢慢将精液注入阴道底部子宫颈口附近即可。为了保证雌兔的受胎效果,在人工授精之前4~6h可在耳静脉注射促性腺激素,刺激雌兔排卵。在人工授精的操作过程中,要注意严格消毒,无菌操作。
4.妊娠
家兔的平均妊娠期约为30天(28~35天)。
判断雌兔妊娠的方法很多,目前最常用,而且准确、简便易行的是摸胎法。方法是在配种或输精后10天左右,抱住雌兔,一手伸入雌兔腹下,手心朝上,手指合拢,在雌兔的小腹处探摸胎儿,怀孕8~10天的胎儿犹如蚕豆大小的扁圆肉球,具有弹性和光滑感。注意要与结肠内粪球相区别。粪球呈硬而缺乏弹性的圆粒状手感。
5.分娩
家兔的分娩过程大致可分为两个阶段,即分娩前的准备阶段、胎儿和胎衣排出阶段。第一阶段的主要变化为子宫肌层开始收缩,子宫颈扩大。此时雌兔表现为阵痛、精神紧张等。第二阶段则是正常分娩及分娩后排出胎衣,胎衣排出后,雌兔一般自己咬断脐带,并吃掉胎衣,同时舔干仔兔身上的血迹和黏液。雌兔分娩的时间较短,一般完成整个分娩只需要20~30min。
6.哺乳和离乳
从仔兔出生到离乳,这段时间称为哺乳期。家兔的哺乳期一般为40~45天,此阶段由于乳汁分泌量大,因此,必须加强雌兔的营养供给。
离乳时的仔兔体重一般在500~1200g。小体型兔500~600g,中体型兔700~900g,大体型兔1000~1200g。离乳时一般将雌兔取出,仔兔留在笼内,以减少仔兔因断奶引起的应激反应。
四、系谱记录
1.家兔的个体识别
(1)繁育记录卡:以每一动物笼上的卡片识别记录,卡片分为白、蓝、黄等不同颜色,卡片上有以动物笼或架及按系谱次序为主的不同编号。
(2)动物个体标记:家兔以刺青于耳朵或用耳钳打洞做记号加以识别,单笼饲养的则以随笼标签、标号为准。
除以上标记外,仍需有以兔繁育卡片及动物笼架为主的识别记录。
2.家兔生产记录卡的填写
每日记录生产相关资料包括初生日、产仔数、离乳日、离乳数及留种或淘汰记录。数据于当日录入实验动物生产管理系统或其他电子记录系统。
用规定格式的记录表统计当日数量,如初生数、离乳数、留种、淘汰及出售总量,将统计好的总量转记于生产记录表上,并输入实验动物生产管理系统内。
五、家兔的生物净化
普通环境下饲养的家兔携带多种病原体,不仅严重影响实验结果的准确性、可靠性和可重复性,而且某些病原体的存在,严重影响家兔的健康和生产供应。1959年,Wostomann和Pleasants首次报道经剖宫产子宫摘子术,人工哺乳培育成功无菌兔子,而后建立不同等级的实验用兔,并广泛用于科学研究和产品质量检定等。家兔的生物净化目前主要以剖宫产净化后人工授乳或带乳为主。
1.生物净化的准备
1)手术隔离器和饲育用具
无菌手术隔离器检漏后以2%过氧乙酸溶液喷雾灭菌,密闭3h后,通风24h吹干备用。
所有耐酸用品置隔离器内,以2%过氧乙酸溶液喷雾灭菌与手术隔离器一起灭菌,其他用品以60Co照射(30kGy以上剂量)或121℃、30min灭菌,从传递窗经2%过氧乙酸溶液喷雾灭菌后传入手术隔离器内备用。
2)剖宫产供体孕兔
经产、健康、怀孕足月(28~35天)的家兔,为避免剖宫产人工哺乳后代的近亲繁殖,应选至少5个不同组别的孕兔。
3)人工乳与饲料
市购婴儿奶粉,以60Co照射灭菌(30kGy剂量),用含善存片溶液配制成含蛋白质浓度为6%~8%的溶液,即为人工乳。购自有许可证单位的饲料经60Co照射灭菌(30kGy剂量)后传入隔离器内。
2.剖宫产
按常规剖宫产手术摘取子宫,浸入2%过氧乙酸溶液(37℃)后迅速装入传递袋,经装有1%过氧乙酸或1%新洁尔灭溶液(37℃)的灭菌渡槽传入手术隔离器内。取下包装袋,迅速将子宫放入无菌水中漂洗数下。然后在子宫颈或两仔兔间的狭窄处,用镊子撕开子宫,取出胎仔,擦去羊膜羊水,并用干净纱布轻轻按摩仔兔,促使呼吸,直至全身发红。成活后剪去仔兔脐带,放入饲育盒内待哺。
3.人工哺乳
用自制乳头,利用虹吸原理,以自动吮吸法于每天早、中、晚定时各授乳一次,每天的哺量为仔兔体重的20%左右。至20日龄时,可辅以经乳液浸软的颗粒饲料,25日龄转入饲养笼内饲养。视其生长发育优劣,可在30~40日龄离乳。
4.哺乳期卫生管理
1~15日龄的仔兔,每天用无菌纱布清洁阴部一次,促使排尿,每周清洁饲育盒1~2次。
5.哺乳期温度控制
初生1~10日龄的仔兔,环境温度控制在32~34℃;10~20日龄降低至30~32℃;20日龄以后逐步降低至饲育室温度。
6.植入正常菌群
植入的菌群必须来自于国家权威的或经过认证的微生物保种单位。仔兔离乳后,按每只口服含菌量为100000000活菌体/ml的肠球菌和1000000000000活菌体/ml的双歧杆菌各1ml;次日口服含菌量为100000000活菌体/ml肠球菌、肠杆菌及拟杆菌各1ml。此后净化离乳的仔兔可通过口服新鲜悉生或SPF级兔粪以建立肠道正常菌群。
7.微生物检测
剖宫产后,取子宫样品或胎盘组织进行微生物学检测。离乳后仔兔每3个月采集血液和粪便等标本检测病毒、细菌、寄生虫。成年兔每季度送1~2只作常规微生物和寄生虫质量检测。