角膜新生血管形成(cornealneovascularization，CNV)是常见的病理现象，研究表明CNV与炎症细胞、缺氧、某些生长因子的调节作用等因素有关。其具体机制尚不清楚。建立合理的CNV动物模型对于探讨CNV的调控机制，研究和评价新生血管抑制药具有重要意义。建立CNV模型的方法包括：物理方法诱导(热灼法或角膜缝线法)；化学方法诱导(碱烧伤法)；角膜囊袋内置入诱导剂(内毒素、碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子)等。

一、实验动物

大鼠或新西兰白兔。

二、模型制作方法

1．碱烧伤法  碱烧伤法为建立CNV的传统方法，属于炎症性模型，通过1mol／L NaOH滤纸烧灼动物角膜后，中性粒细胞浸润角膜基质，局部花生四烯酸衍生物合成增加，导致血管通透性增加，血管扩张，诱导新生血管形成。诱导新生血管的发生机制可能为碱与组织蛋白结合形成碱化合物，使角膜组织蛋白溶解而渗透至角膜基质深部，角膜基质屏障功能受到破坏，引起角膜水肿，并使角膜板层的阻力减少，有利于新生血管长入；再者，在炎症因素下，角膜新生血管生长因子高表达促进新生血管的形成。新生血管的形成过程较复杂，一般分为角巩膜缘及结膜血管的扩张与通透性增大、炎细胞浸润角膜；血管内皮细胞的活化、增生与游动，伴血管出芽、管腔形成与血管支吻合；局部小静脉基底膜和细胞外基质被蛋白水解酶降解；基底板形成；毛细血管消退与血管成熟。碱烧伤后出现角膜中央混浊、角膜水肿，血管网充盈，逐渐可出现角膜缘有新生血管向角膜中央生长，所建立的模型符合新生血管的一般发病规律。该方法具有制作简便、影响因素容易控制等优点，符合角膜新生血管的病理发展，是研究炎症性新生血管发病机制和治疗的重要手段。然而，该方法所引起的新生血管生长方式及速度不稳定，血管密度不均匀，不便于定量分析及长期观察，但由于其简单易行、所需仪器少，在实验研究中仍具有一定实用价值。

操作：将同一规格同一直径(鼠眼一般为4mm，兔眼10mm)的单层滤纸片浸泡在浓度为1mol／L NaOH溶液中达到饱和状态，吸去多余液体。动物麻醉后，将浸泡后的滤纸片置于角膜表面1min后，以生理盐水冲洗1min。用氯霉素滴眼液滴眼，此时在角膜中央可见圆形灰白色角膜烧伤区。术后氯霉素滴眼液每天滴眼4次，预防感染。

2．角膜缝线法  角膜缝线法诱导角膜新生血管的机制为异物所致的炎症反应，此方法的优点在于操作简便，有利于观察和比较新生血管生长情况，可排除化学方法的化学药物对防治药物的影响，对角膜损伤小，防治术后感染较其他方法容易，能较好地模仿临床的炎症刺激形成角膜新生血管的病理发展过程。

操作：动物麻醉后，复方托品酰胺眼液散瞳，手术显微镜下用10-0缝针尼龙线于11：00、12：00、1：00点钟位置穿过角膜基质层等间距间断缝合3针，进针位置距离角膜中心一致、跨度一致，深达2／3角膜厚度，缝线尾在角膜表面长约1mm，线结暴露不包埋。

三、结果观察

1．裂隙灯显微镜观察

(1)观察CNV生长情况：每只眼球于上、下、左、右4个方位拍摄包括角膜缘和角膜侧面照片，经计算机图像处理系统计算新生血管的面积。

(2)角膜上皮缺损直径：以荧光素钠对角膜进行染色，裂隙灯显微镜下观察，直尺测量最长直径及其垂直直径，取平均值。

(3)角膜混浊程度评分如表8-2。

表8-2  角膜混浊程度评分

2．组织病理学观察  模型眼角膜组织病理学观察可见角膜基质胶原纤维排列紊乱、炎性细胞增多，新生血管腔增多。