目的 探究 rpl15 基因在野生型斑马鱼胚胎中的表达形式。 

方法 利用 NCBI 和 Ensemble 数据库 进行 rpl15 基因的共线性分析和 Rpl15 蛋白质序列相似性分析,使用 MEGA X 软件绘制进化树;构建 pCS2+ -rpl15 重组质粒,再利用 T3 聚合酶制备地高辛标记的 rpl15 反义 RNA 探针,用全胚胎原位杂交检测 rpl15 基因的 mRNA 水平的表达;通过 Western blot 检测 24、48 和 72 hpf 斑马鱼胚胎中 Rpl15 蛋白的表达。 

结果 在进化过程中,rpl15 基因相对保守。 构建了 pCS2+ -rpl15 重组质粒,原位杂交结果显示在 24 hpf,rpl15 基因在斑马鱼的几乎所有细胞中广泛表达;到 48 hpf,rpl15 在中枢神经系统的表达最强并且在胰腺的表达也开始显现;72 hpf 仍然可见 rpl15 在后脑中的表达以及胰腺、肝和肠道中的表达。 Western blot 结果显示 24、48 和 72 hpf 斑马鱼胚胎中 Rpl15 蛋白的相对表达量随时间增加而增多。 

结论 系统观察了斑马鱼发育过程中 rpl15 的表达部位及表达水平的变化,为斑马鱼 rpl15 缺失模型的建立提供了实验基础。

阅读原文：rpl15在斑马鱼胚胎中的表达形式探究.pdf