目的 利用微滴式数字 PCR（droplet digital PCR，ddPCR）技术，对猪基因组中猪内源逆转录病毒（porcine endogenous retrovirus，PERV）拷贝数测定方法进行优化，建立 PERV 拷贝数的检测方法。

方法 采用TaqMan 探针双重 ddPCR方法，分别以甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）和转铁蛋白受体（transferrin receptor，TFRC）为内参基因，确定对 PERV拷贝数检测反应最适合退火温度和反应循环数。另外，通过对浓度梯度稀释的标准品质粒和猪细胞基因组进行检测，以确定最适模板浓度。采用 ddPCR 和qPCR 两种方法测定来自猪源细胞系和巴马小型猪组织中 PERV的拷贝数，比较两种检测方法的稳定性。

结果 基于ddPCR技术检测 PERV拷贝数的最适退火温度为59.9℃，最佳反应循环数为50;模板基因组的最话浓度在1.25~7.5 ng;检测同一样品来源基因组中PERV的拷贝数的变异系数在0.44%~8.29%。

结论 本研究建立了基于ddPCR 技术的 PERV拷贝数的检测方法并系统的探索了最佳实验条件，与传统的 qPCR 相比，该方法具有更高的准确性和可重复性，为异种移植研究中供体动物基因组PERV拷贝数的测定提供了灵敏的方法和可靠依据。

阅读原文：基于微滴式数字PCR技术对猪内源逆转录病毒拷贝数的检测方法的建立及应用.pdf