目的 探讨miR-16-5p对缺氧复氧诱导的大鼠正常肝细胞系BRL-3A焦亡的作用以及作用机制。

方法 通过细胞缺氧复氧的方法构建肝缺血再灌注损伤(HIRI)的体外模型,通过流式细胞术检测细胞焦亡率;通过荧光实时定量 PCR(RT-qPCR)检测 miR-16-5p 的表达水平;运用 miR-16-5p mimic 在细胞中过表达 miR-16-5p 并研究 miR-16-5p 对细胞焦亡的影响;通过蛋白免疫印迹实验(Western blot)检测焦亡相关蛋白 caspase1、IL-1β、IL-18 的蛋白表达水平;通过生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验预测并鉴定 miR-16-5p 与 NLRP1 的靶向关系; 通过过表达和干扰 NLRP1,研究 NLRP1 及 miR-16-5p / NLRP1 轴对细胞焦亡的影响。 

结果 与空白对照组相比,模型组焦亡率极显著上升(P<0. 01),miR-16-5p 表达量显著降低(P<0. 05)。 过表达 miR-16-5p 极显著抑制细胞焦亡 (P<0. 01)并抑制焦亡相关蛋白 caspase1、IL-1β、IL-18 的表达(P<0. 01 或 P<0. 05)。 双荧光素酶报告基因实验显示 NLRP1 是 miR-16-5p 的靶基因,过表达 miR-16-5p 显著降低了 NLRP1 的 mRNA 和蛋白水平( P< 0. 01 或 P< 0. 05)。 此外,过表达 NLRP1 逆转了 miR-16-5p 对细胞焦亡的抑制作用(P<0. 01)和对 caspase1、IL-1β、IL-18 表达的抑制作用(P<0. 01 或 P<0. 05)。 

结论 MiR-16-5p 通过靶向 NLRP1 来抑制 caspase1、IL-1β、IL-18 的表达,从而改善缺氧复氧引起的 BRL-3A 细胞焦亡。

阅读原文：miR-16-5p靶向NLRP1抑制缺氧复氧诱导的BRL-3A细胞焦亡.pdf