目的 探讨环状 RNA 同源域相互作用蛋白激酶 3(circHIPK3)低表达对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导的海马神经元凋亡的影响。 

方法 采用生物信息学软件预测和双荧光素酶报告基因实验验证微小 RNA-124(miR- 124)与 HIPK3、信号转导和转录激活因子 3(STAT3)的靶向关系;将体外培养的原代海马神经元分为对照组(正常 培养)、Aβ 组(给予 Aβ 刺激)、Aβ+siSTAT3-NC 组(转染 siSTAT3-NC 后给予 Aβ 刺激)、Aβ+siHIPK3 组(转染 siHIPK3 后给予 Aβ 刺激)、Aβ+siHIPK3+antimiR-NC 组(共转染 siHIPK3 和 inhibitor-NC 后给予 Aβ 刺激)、Aβ+ siHIPK3+antimiR-124 组(共转染 siHIPK3 和 miR-124 inhibitor 后给予 Aβ 刺激)、Aβ+siHIPK3+antimiR-124+siSTAT3 -NC 组(共转染 siHIPK3、miR-124 inhibitor 和 siSTAT3-NC 后给予 Aβ 刺激)和 Aβ+siHIPK3+antimiR-124+siSTAT3 组(共转染 siHIPK3、miR-124 inhibitor 和 siSTAT3 后给予 Aβ 刺激)。 采用实时荧光定量 PCR( qRT-PCR) 检测 HIPK3 和 miR-124 表达水平,免疫印迹法(Western blot)检测 STAT3 蛋白表达水平,噻唑蓝(MTT)法和流式细胞仪分别检测海马神经元存活率和凋亡率,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶 3(Caspase-3) 活性检测试剂盒检测 Caspase-3 活性。 

结果 生物信息学软件预测、双荧光素酶报告基因实验证实 HIPK3 可与 miR-124 靶向结合;生物信息学软件预测、双荧光素酶报告基因实验和 Western blot 实验证实,miR-124 可靶向调控 STAT3 蛋白表达。 与对照组比较,Aβ 组海马神经元中 HIPK3 表达水平、STAT3 蛋白表达水平、凋亡率和 Caspase-3 活性明显升高,而海马神经元存活率和 miR-124 表达水平明显降低(P<0. 05);与 Aβ+siHIPK3-NC 组比较,Aβ+siHIPK3 组中上述各指标明显逆转(P<0. 05);与 Aβ+siHIPK3+antimiR-NC 组比较,Aβ+siHIPK3+antimiR-124 组中各指标呈明显变化(P< 0. 05),且趋势与 Aβ+siHIPK3 组相反;与 Aβ+siHIPK3+antimiR-124+siSTAT3-NC 组比较,Aβ+siHIPK3+antimiR-124 +siSTAT3 组中各指标呈明显变化(P<0. 05),且趋势与 Aβ+siHIPK3+antimiR-124 组相反;而 Aβ 组与 Aβ+siHIPK3- NC 组之间、Aβ+siHIPK3 组与 Aβ+siHIPK3+antimiR-NC 组之间以及 Aβ+siHIPK3+antimiR-124 组与 Aβ+siHIPK3+ antimiR-124+siSTAT3-NC 组之间各指标差异无统计学意义(P>0. 05)。 

结论 CircHIPK3低表达可抑制Aβ诱导的海马神经元凋亡,其作用机制与调控miR-124/STAT3轴有关。 

阅读原文：CircHIPK3低表达调控miR-124STAT3轴抑制Aβ诱导的海马神经元凋亡的机制研究.pdf