牛S抗原诱发大鼠葡萄膜视网膜炎模型

来源:《眼科实验动物学》 发布时间:2022年05月18日 浏览次数: 【字体: 收藏 打印文章

使用牛S抗原和完全弗氏佐剂的混合乳剂免疫大鼠14d后,将S抗原接种于玻璃体腔,复制大鼠抗原诱导性葡萄膜视网膜炎模型。

1.模型制作方法  Wistar大鼠,体重140~180g,雌性。

(1)S抗原的纯化:将新鲜牛视网膜冰浴下研磨制成匀浆。离心(12 000r/min,60min),取上清,饱和硫酸铵4℃沉淀过夜。离心(4 000r/min,30min),弃上清,去离子水溶解沉淀,并移至透析袋,置0.15mol/L氯化钠溶液透析24h(换液3次),再置于2.5mmol/L二羟基氨基甲烷盐酸盐溶液(Tris.HCl)溶液(pH7.5)中透析24h(换液3次)。透析后的样品离心(12 000r/min,4℃,60min),取上清用于层析。使用DEAE2 Sepharose FF凝胶,XK26柱(2.6cm×16cm),每批40个视网膜充填50ml凝胶。常规装柱,用3个柱体积层析缓冲液(20rmmol/LTris.HCl,0.01%叠氮钠,pH 7.5)平衡。加样后,3~5个柱体积层析缓冲液洗柱,流速为4~7ml/min,至杂蛋白峰回落至基线。用0~0.4mol/L氯化钠线性洗脱,流速为2ml/min,共用8个柱体积洗脱。用高盐、碱、乙醇双向流动进行柱再生、清洗和消毒。

(2)将S抗原(1mg/ml)加等量完全弗氏佐剂混合成乳剂,取0.2ml皮下注射于大鼠的后足底部致敏大鼠。14d后将10μg牛S抗原接种于实验鼠右眼玻璃体腔,建立抗原诱导性葡萄膜视网膜炎(AIU)模型。抗原接种于玻璃体腔方法为,用氯胺酮+氯丙嗪混合液(各含25~50mg/kg,肌内注射)麻醉大鼠,术眼用托吡卡胺扩瞳及1%丁卡因表面麻醉。穿刺前房后,用微量进样器在睫状体平坦部刺入玻璃体腔内注入含10μg牛S抗原的PBS溶液10μl。

2.观察指标与分析

(1)症状:模型组大鼠于玻璃体腔注射后1d即有严重的以眼后节段为主的葡萄膜炎表现。

(2)病理学检查:光镜下观察可见葡萄膜视网膜炎急性期(玻璃体腔注射后1~5d取材)出现全葡萄膜炎的病理改变,主要有前房炎症细胞渗出,玻璃体腔有大量炎症细胞及蛋白渗出物,葡萄膜和视网膜增厚并且有炎症细胞浸润,严重者感光细胞被破坏。而晚期(玻璃体腔注射10d后取材)可见视网膜局灶性炎性反应。

(3)血清抗体效价测定:双向免疫扩散法测出S抗原和抗血清之间出现清晰地反应带,血清抗体滴度为1:8~1:16。

特点:应用牛黑色素诱导的大鼠葡萄膜炎(EMIU)与人类急性前部葡萄膜炎(AAu)有着很大的共同性,二者病程持续时间相似,分别为6周和1个月,眼部体征相似,虹膜血管充血扩张,前房纤维渗出及白细胞渗出,虹膜粘连等。所不同的是,EMIU一般导致双眼炎症,而AAu一般只是单眼发病,EMIu通常在各年龄段的不同性别的大鼠都可以发生,而AAU通常只在年轻男性发生,因此不难看出,EMIU委实是研究人类葡萄膜炎的很好的动物模型。


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