冬凌草甲素调控miR-200c/EZH2轴抑制黑色素瘤细胞上皮-间质转化的机制研究

来源:中国比较医学杂志2022年第5期 发布时间:2022年08月16日 浏览次数: 【字体: 收藏 打印文章

目的 探究冬凌草甲素调控微小 RNA200c(miR-200c) / 组蛋白甲基化转移酶果蝇 zeste 基因增强子同源物 2(EZH2)轴抑制黑色素瘤细胞(A375 细胞)上皮-间质转化(EMT)的影响机制。 


方法 MTT 法检测冬凌草甲素对 A375 细胞活力的影响;将 A375 细胞分为对照组、冬凌草甲素组、mimic control 组、miR-200c mimics 组、冬凌草甲素+inhibitor control 组、冬凌草甲素+miR-200c inhibitor 组,qRT-PCR 检测 miR-200c、EZH2 mRNA 表达情况;免疫印迹法检测 EZH2 及 EMT 相关蛋白表达情况;黏附实验检测 A375 细胞黏附能力;Transwell 实验检测 A375 细胞侵袭及迁移能力;荧光素酶报告基因实验检测 miR-200c 与 EZH2 的靶向关系;构建移植瘤裸鼠模型,检测肿瘤质量;免疫组化法分析 EMT 相关蛋白表达情况。 


结果 A375 细胞存活率随冬凌草甲素浓度的增加以剂量依赖性显著降低(P<0. 05),由于 40 μmol / L 冬凌草甲素接近半数抑制浓度,因此选取 40 μmol / L 冬凌草甲素进行后续实验; 与对照组相比,冬凌草甲素组、miR-200c mimics 组 A375 细胞中 miR-200c、钙粘附蛋白 E(E-cadherin)表达水平显著增加,EZH2 mRNA 及蛋白表达水平、神经型钙黏附蛋白(N-cadherin) 及波形蛋白(Vimentin) 表达水平、迁移细胞数、侵袭细胞数、黏附细胞数显著降低(P<0. 05);与对照组、mimic control 组相比,miR-200c mimics 组 EZH2 蛋白表达水平显著降低(P<0. 05);miR-200c 沉默可逆转冬凌草甲素对 A375 细胞的作用;与对照组相比,冬凌草甲素组肿瘤质量、EZH2 mRNA、N-cadherin 及 Vimentin 蛋白表达水平显著降低,miR-200c、E-cadherin 蛋白表达水平显著增加 (P<0. 05);与冬凌草甲素组相比,冬凌草甲素+miR-200c inhibitor 组肿瘤质量、EZH2 mRNA、N-cadherin 及 Vimentin 蛋白表达水平显著增加,miR-200c、E-cadherin 蛋白表达水平显著降低(P<0. 05)。 


结论 冬凌草甲素可能通过促进 miR-200c / EZH2 轴来抑制 A375 细胞的 EMT 及肿瘤生长。 


阅读原文:冬凌草甲素调控miR-200cEZH2轴抑制黑色素瘤细胞上皮-间质转化的机制研究.pdf


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