目的 探讨小鼠第 13. 5 天胚肝细胞是否通过抑制 β-Catenin 诱导人肝细胞肝癌细胞株 HepG2 细胞分化及其作用机制。 

方法 用免疫荧光法检测肝细胞标记分子-白蛋白(ALB)的分布,以鉴定小鼠第 13. 5 天胚肝细胞。 小鼠第 13. 5 天胚肝细胞与 HepG2 细胞株共培养 24 h、48 h 后,采用 qRT-PCR 方法检测 HepG2 细胞株中肝癌标记分子-甲胎蛋白(AFP)、肝细胞分化调控因子-肝细胞核因子 4α(HNF-4α)和成熟肝细胞标记分子-细胞色素 P450 家族成员 1B1(CYP1B1)和乙醇脱氢酶 1C(ADH1C)的 mRNA 表达。 共培养 48 h 后,观察 HepG2 细胞株形态变化,采用 Western blot 法检测 AFP、HNF-4α 和 β-Catenin 的蛋白含量,免疫荧光法检测 β-Catenin 蛋白在细胞的分布。 应用 β-Catenin 抑制剂处理后,观察 HepG2 细胞株形态变化并且检测 AFP 蛋白表达。 

结果 原代培养细胞 ALB 荧光显示阳性。 与对照组相比,共培养后 HepG2 细胞株中,AFP 相对 mRNA 表达量在 24 h 和 48 h 均显著降 低,HNF-4α、CYP1B1 和 ADH1C 的相对 mRNA 表达量在 24 h 和 48 h 均显著升高。 与对照组相比,共培养 48 h 后, HepG2 细胞株生长明显抑制,细胞形态趋于正常肝细胞的六边形,AFP 和 HNF-4α 蛋白表达明显升高。 与对照组相比,共培养 48 h 后,β-Catenin 的蛋白含量明显降低,同时 HepG2 细胞株中 β-Catenin 的荧光明显减弱。 与对照组相比,β-Catenin 抑制剂处理可明显改变 HepG2 细胞株形态,引起共培养组 HepG2 细胞株形态更剧烈的变化,显著抑制 AFP 的蛋白表达。 

结论 小鼠第 13. 5天胚肝细胞可能主要通过抑制 β-Catenin,诱导 HepG2 细胞株分化。 

阅读原文：小鼠第13.5天胚肝细胞诱导HepG2细胞分化的作用机制.pdf