关注动物福利：肿瘤研究中大小鼠的人道终点
近年来，越来越多人提倡实验动物的“3Rs”原则，即Reduction（减少）、 Replacement（替代）与Refinement（优化）。出于伦理、科学和法律方面的考虑，选择合适的人道终点，将对动物的不良影响降到最低，是3Rs中“优化”的重要组成部分。
对于高质量的肿瘤研究而言，合理的人道终点能降低非特异性的系统效应，从而增加所获得结果的准确性；而对于肿瘤项目研究中的实验动物来说，健康和福利是毋庸置疑放在首位的。
那么，到底该如何确定肿瘤研究中的人道终点呢？跟着赛博士一起往下学习吧。
一、如何确定肿瘤研究中的人道终点？ 首先声明，本文所提出的人道终点，是基于广泛使用的动物实验而言。若细化到每一项研究中，都应该考虑实验本身进展的特点，来控制人道终点。例如，一旦肿瘤进展明显，致癌性研究就可以终止；反之，有些肿瘤在其发展后期才会发生恶性转化，则需要推迟人道终点，比如致癌物诱导的皮肤乳头状瘤。 1 预实验，用以确定肿瘤生长的完整程度，将有助于确定可靠和精确的人道终点。 特定模型的人道终点还必须考虑到所述特定肿瘤模型的已知发病机制，并应根据经验定期审查。成像技术有助于为某些肿瘤模型开发提供更明确的人道终点。我们应尽一切努力，找出各种影响因素，并结合考虑到对动物福利的影响，尽早作出科学决定。故意以死亡作为终点，是不可接受的行为。 2 固体肿瘤的位置选择将影响最大可接受肿瘤负荷和适当的人道终点。 （1）脚垫、尾巴、眼睛或骨头等部位可能会疼痛或痛苦，需要特殊的理由以及更早的人道终点。同样，转移到敏感部位的肿瘤也需要非常小心。 （2）如果必须要进行脑部肿瘤，比如为了增进对脑肿瘤生物学特性的了解、并开发治疗方法，据报道，体重减轻可以作为人道终点指标，核磁共振或生物发光成像（BLI）技术可能非常有用。 （3）肌内肿瘤是痛苦的，只有在原位研究（如肉瘤）有充分理由的情况下才可以进行。 3 对于转基因动物，需要特别照顾，以确保及时检测出肿瘤发展的意外部位。 与所有内部肿瘤部位一样，这包括临床检查、体重测量、腹部触诊和状态变化。在实验开始前，研究人员、兽医和动物饲养管理人员之间，必须进行讨论以确定人道终点、专业的饲养管理和干预措施。通过检测和评估实验分析数据（如药效学测定、功能成像），获取详细的表型信息，有助于确定合理的终点。 用于癌症治疗研究中的动物技术示例[1] 二、肿瘤负荷 肿瘤负荷在临床上是指肿瘤对机体的危害程度，一般情况下，评估包括肿瘤大小、肿瘤活跃程度、肿瘤转移，以及肿瘤位置对机体的危害程度等。评估肿瘤的大小和负荷是确定人道终点的重要依据。 1 肿瘤负荷应始终限制在有效的科学结果所需的最低限度 疗效研究一旦显示出持久的、统计上显著的治疗效果，就应该终止。治疗性研究的设计应控制肿瘤体积，避免肿瘤过大。任何肿瘤在单纯用于常规移植或作为肿瘤组织来源时都应限制其大小。在所有情况下，动物的总体健康和状况仍然是最重要的决定因素。对动物的不良影响将取决于生物学、部位、肿瘤的生长方式和任何额外的操作或治疗。 对于携带单个肿瘤的动物，肿瘤平均直径在正常情况下，小鼠不应超过1.2厘米，大鼠不应超过2.5厘米；如果是用于治疗研究，分别不应超过1.5和2.8厘米。例如，在每只动物的对侧长有两个肿瘤的地方，肿瘤的大小应相应减小，且不应超过单个肿瘤的最大负荷。在转基因动物中可能发生多种肿瘤或在受到紫外线辐射或化学致癌物的动物皮肤上进行的试验，也应该观察到类似的限制。如果有特殊要求，超过建议的肿瘤大小限制，应经过严格的科学评估。 2 使用游标卡尺测量浅表肿瘤的大小是一种简单易行的方法 确保在研究期间技术人员熟练且稳定，可以将测量偏差最小化。对治疗的反应可以通过肿瘤生长速度的变化，重新生长的延迟，细胞存活(通过克隆试验测量)或适当的替代标记物来衡量。在研究结束时切除肿瘤并称重可以提供一个额外的客观终点，这可以减少由于肿瘤形状变化和体积或质量评估的误差。 3预实验、观测替代标志物是有效的辅助手段 确定内部原位癌、系统性淋巴网状肿瘤或转移性疾病的肿瘤负荷是具有挑战性的。使用少量动物进行预实验，对于确定肿瘤传播动力学和模式、预测临床症状和确定人道终点都非常重要。生物标志物或循环癌细胞可作为评估淋巴瘤和白血病负荷的替代物，通过实时成像监控这些替代物，是种有效的辅助手段。我们应使用适当的生化和病理指标、工程报告系统或成像技术来确定疾病的开始。还必须根据动物的一般情况，以及可触到的肿瘤和特定体征（如后肢无力或瘫痪）进行评估。 临床前癌症研究中的体内成像示例[1] 三、临床症状 一般情况下，下列情况所示的临床体征是罕见但严重的潜在不良反应症状的主要指标，在设计良好的实验研究中，此类严重症状可能很少出现，应避免，一旦发现应立即实施人道终点，并对研究中其他动物加强观察。 需要立即干预的动物临床症状： ❖24-48小时内不进食或不饮水，导致消瘦或脱水。 ❖与实验前的成年小鼠或与同周龄的对照组动物相比，72小时内体重持续或快速下降20%或15%。不过对于某些肿瘤来说，体重不是一个很好的指标，可以使用肌肉萎缩或消瘦作为评价指标。身体状况评分是非常有用的肌肉损失指标。 ❖持续低体温。 ❖从任何天然孔流出有血或粘液脓的分泌物。 ❖呼吸困难，特别是伴有流鼻水和/或发绀。 ❖淋巴结或脾脏肿大。 ❖后肢瘫痪或无力。 ❖贫血，症状如脚部苍白或血液学指标。 ❖显著腹胀或腹水负担超过体重的10%，和同周龄对照组动物相比。很难准确测定，但可以测量腰围，通常允许的腰围最大增加20%；类似于怀孕鼠的外观。 ❖尿失禁或腹泻超过48小时。 ❖影响运动或引起异常发声、动物行为或功能的肿瘤。 另外，对于实体瘤来说，出现溃疡，覆盖组织膨胀和恶病质（严重体重下降）应纳入人道终点的评估。溃疡是一种浅表组织坏死的典型病变，可能是干燥，化脓或渗出。坏死导致皮肤破裂或渗出持续超过48小时可以考虑人道终点。有些肿瘤，如生长在敏感部位或发展为广泛坏死的肿瘤，可能给动物带来痛苦，尽管缺乏对小鼠的客观判断标准。需要进一步的研究，以更好地评估疼痛，并协助制定最适当的人道终点。 
总结:
当已经超出科学目标所需要的动物痛苦程度时，当科学目标已经实现或无法实现时，或当无法达到实验结果质量时，应规定人道终点并采取行动实施人道终点，保障动物福利。
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