目的 鉴定肠上皮 Tlr4 特异性敲除(Tlr4f/ f cre T)鼠,评价其免疫学特征。
方法 应用 CRISPR/ Cas9 技术构建 Tlr4f/ f cre T 基因鼠,PCR 和免疫荧光鉴定 Tlr4f/ f cre T 基因鼠基因型,观察基因鼠的一般生物学特征、繁殖能 力和子代存活率。 HE 染色、流式细胞术及 ELISA 比较基因鼠和野生型小鼠免疫器官结构、肠黏膜免疫细胞比例及细 胞因子分泌水平差异。
结果 从基因和蛋白水平验证 Tlr4f/ f cre T 基因鼠的建立。 与野生型鼠比,Tlr4f/ f cre T 基因鼠 的一般生物学特征无明显差异、子代存活率 > 90%;胸腺、脾及肝生理结构无显著性差异;脾淋巴细胞增殖能力、血清 及肠黏膜细胞因子分泌水平无显著性差异;但 CD4+ T 和 γδT 细胞显著减少。
结论 成功构建了肠上皮 Tlr4 特异性敲 除小鼠(Tlr4f/ fcre T),为研究肠上皮 Tlr4 基因在肠道疾病、肿瘤及代谢性疾病中的作用提供实验手段。