目的 探讨长链非编码 RNA 序列相似家族 83 成员 A-反义核糖核酸 1( lncRNA FAM83A-AS1)在乳 腺癌(breast cancer, BC)中的作用及潜在机制。
方法 免疫组织化学(IHC)染色检测 BC 组织中 FAM83A 的表达; 实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)检测 BC 组织/ 细胞中 lncRNA FAM83A-AS1、FAM83A mRNA 表达水平;Pearson 法分 析 BC 组织中 lncRNA FAM83A-AS1、FAM83A mRNA 表达水平的相关性。 细胞转染建立基因过表达和沉默 MDAMB-231 细胞模型,qRT-PCR 检测 MDA-MB-231 细胞中 lncRNA FAM83A-AS1、FAM83A mRNA 表达水平;CCK-8 法 检测 MDA-MB-231 细胞增殖活力;Transwell 实验检测 MDA-MB-231 细胞迁移、侵袭能力;Western blot 检测 MDAMB-231 细胞中 FAM83A、ERK1 / 2 及其磷酸化蛋白、Ki-67、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶 9(MMP-9)蛋 白表达;核质分离实验检测 lncRNA FAM83A-AS1 的亚细胞分布,lncRNA FAM83A-AS1 与 FAM83A 之间的相互作用 通过 RNA pull-down、RNA 免疫沉淀(RIP)和 qRT-PCR 测定进行验证;裸鼠成瘤实验检测 lncRNA FAM83A-AS1 沉 默对 MDA-MB-231 细胞体内生长的影响;IHC 染色检测肿瘤内 Ki-67、FAM83A 的表达。
结果 在 BC 组织和细胞 中 lncRNA FAM83A-AS1 和 FAM83A mRNA 的表达显著上调( P< 0. 05);Pearson 分析显示,BC 组织中 LncRNA FAM83A-AS1 与 FAM83A mRNA 表达水平呈正相关( r = 0. 885,P<0. 05)。 LncRNA FAM83A-AS1 沉默降低 MDAMB-231 细胞增殖活力,抑制 MDA-MB-231 细胞的迁移与侵袭,促进 E-cadherin 表达,抑制 FAM38A、Ki-67、MMP-9 表达和 ERK1 / 2 活化,并抑制裸鼠体内移植瘤的生长( P < 0. 05);上调 FAM83A 的表达,可明显减弱 LncRNA FAM83A-AS1 的沉默对 MDA-MB-231 细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用(P<0. 05)。 LncRNA FAM83A-AS1 在细胞 核与细胞质中均有分布,能够通过 RNA 结合蛋白 FBL 与 FAM83A 结合以增加 FAM83A 的表达。
结论 LncRNA FAM83A-AS1 可以通过上调 FAM83A 来促进 MDA-MB-231 细胞的增殖、迁移与侵袭。
阅读原文:LncRNA FAM83A-AS1调控FAM83A表达对乳腺癌细胞增殖、侵袭与迁移的影响.pdf