霍乱菌动物模型

来源:《常见和新发传染病动物模型》 发布时间:2023年01月13日 浏览次数: 【字体: 收藏 打印文章

Olivier等于2007年使用5周龄C57BL/6小鼠建立了霍乱弧菌感染模型,并用该模型研究了溶血素在霍乱弧菌感染中的作用。

一、菌种

模型所使用菌株为链霉素抗性的霍乱弧菌。将过夜培养的霍乱弧菌培养物用含有100mg/ml链霉素的LB培养基稀释,然后在30℃培养至对数中期,或者OD600达到0.5左右。收集细菌,用PBS洗涤两次。采用平板涂布法,将菌悬液涂布至LB平板,计算每毫升菌悬液中的cfu。

二、感染方法

4~5周龄SPF级雌性C57BL/6小鼠(BABL/c小鼠亦可),小鼠自由饮用链霉素溶液(1mg/ml)4~7d。感染的前夜禁食,但不禁水。在感染操作时,小鼠腹腔注射氯胺酮(60~70mg/kg体重)和甲苯噻嗪(12.5mg/kg)麻醉,随后用50μl的8.5%的碳酸氢钠灌胃并立即用22G的灌胃针在胃中注入50μl悬浮在PBS中的细菌悬液。

三、病原检测

分别在感染后的1h、3h、6h、12h、24h、48h和72h处置小鼠,采集小肠、盲肠和大肠。将小肠切为近端、中端和远端三段,然后将所有的器官在PBS中匀浆,梯度稀释之后涂布到LB平板培养,可以形成菌落并计算菌落数。

四、模型鉴定

小鼠感染后,霍乱弧菌在1小时内达到小肠的近端,3h后到达小肠的中端,6h后达到小肠的远端。在感染后的3~6h内,小肠的中端和远端的霍乱弧菌数目达到高峰,超过感染剂量,并在感染后12h达到复制的最高峰。随后,小肠内的霍乱弧菌数目开始降低,数目达到接种量的千分之一,并在72h内维持稳定。

在该模型中,10的8次方的感染剂量可达到100%的致死率,小鼠感染后24h内便开始死亡。然而,当感染剂量降低时,小肠内的细菌在12h内便被清除完全,而盲肠与大肠中的细菌在72h内被清除完全。

10的7次方cfu野生型V.cholerae感染小鼠(非致死量)导致严重的组织坏死。感染后12h取小鼠小肠远端、中段、末端做病理HE染色,可以观察到感染小鼠末端小肠腔内坏死细胞沉积(图25-3)。

Baidu
map