改良线栓法制作大鼠局灶性脑缺血模型

来源:《常用医药研究动物模型》 发布时间:2023年02月15日 浏览次数: 【字体: 收藏 打印文章

1.造模材料  动物:健康SD成年大鼠,体重250~300g,雌雄不限;药品:水合氯醛。

2.造模方法  制备前准备:①栓线的制作:采用Longa线栓法将直径0.2mm的尼龙线展开,线的一端靠近酒精灯的火焰上快速烧灼,使线段一端熔化成一个膨大的球状,在显微镜下将尼龙线剪成约20mm的小线段备用;②实验器材的准备:调试好手术显微镜、显微器械,将1-0手术丝线剪成2段10cm长的线段备用。

麻醉:10%水合氯醛按0.35ml/100g体重的剂量腹腔注射麻醉,注射器针头从腹部向头方向缓慢刺入腹腔,为避免误刺入肠管内,推药前回抽针芯,阻力较大,无回血,无胃肠道内容物,证明注射器针头在腹腔里,缓慢推注麻醉药剂。麻醉后约10min大鼠逐渐瘫软,反应淡漠,用手牵拉大鼠尾部无明显反抗时将大鼠固定,主要固定大鼠上颌的两个中切齿和双侧上下肢。实验过程中,用红外线烤灯照射维持大鼠肛温在37℃左右,直到恢复活动。室温保持在20℃以上。

备皮刀刮大鼠颈前区毛发,碘酒酒精消毒皮肤,置于手术显微镜下进行操作。取颈部正中切口,上自颈部与下颌反折处,下方到达胸骨角。剪开阔筋膜,显露左侧胸锁乳突肌,从胸锁乳突肌和颈前部肌群之间向深部分离,用血管钳将皮肤及皮下组织向外侧牵开,用显微镊子从颈动脉搏动处牵开薄层肌肉组织,撕开薄层结缔组织,即达到颈总动脉,沿此间隙继续向上分离,找到颈总动脉分叉。从左侧颈总动脉下方穿过一段1-0手术丝线牵引线,左侧颈内动脉下方也穿过一段牵引线,用血管钳提起,拉向大鼠左侧,压闭颈总动脉以及颈内动脉以控制剪开动脉时的出血。用3-0手术丝线结扎颈外动脉远端及枕动脉,在结扎线离分叉部2mm处剪断颈外动脉,将一端已加工成光滑球形的尼龙线从颈外动脉残端插入进行结扎,将尼龙线经颈总动脉分叉部插入颈内动脉,此时松开颈总、颈内动脉套线恢复血流,线栓推送顺滑,无出血。将线栓向上深入至分叉以上18~19mm时,轻推尼龙线感觉有阻力,此时已达到大脑中动脉开口处,阻断了大脑中动脉血流。若栓线插入深度至10~13mm即感到有明显阻力,说明栓线没有通过颈内动脉进入颅内,而是误入了翼腭动脉,需要退回栓线,将线栓变换到颈内动脉方向重新插入。

3.造模原理  将尼龙线头端烧成鼓槌状从颈外动脉或颈总动脉分叉处插入,经颈内动脉达到大脑中动脉开口处阻断血液循环,导致大脑中动脉供血区域脑组织局灶缺血。

4.造模后的变化  线栓法栓塞后,大鼠一般2h左右清醒,醒后观察大鼠出现行动迟缓、站立不稳。24h后栓塞大鼠均出现同侧Homer征、自发瘫痪侧旋转、提起尾巴对侧前肢无力屈曲、反抗力减弱等神经废损体征。

大鼠线栓24h后处死,手术显微镜下掀开大鼠颅骨探查见缺血脑组织呈灰白色,颅底见栓线头端恰好位于大脑中动脉开口处。脑组织切片用1%氯化四唑(tetrazolium chlo-ride, TTC)/磷酸缓冲液染色观察,可以看到大鼠大脑左侧额顶皮质以及基底节区大范围的梗死区,呈现白色,而正常血流供应区域呈现红色,界限分明,容易辨认。

5.注意事项  操作中动作要轻柔,线栓进入颅内时,避免强行推送,以免损伤血管甚至穿破血管导致蛛网膜下腔出血而死亡。


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