S-亚硝基化分析
S-亚硝基化(SNO)是指部分亚硝基(NO)与蛋白质的巯基残基(S)共价连接形成S-亚硝基。巯基残基属于蛋白质中特定半胱氨酸残基的子集,所得的SNO为S-亚硝基蛋白。SNOs在细胞质中的半衰期很短,因为有许多还原酶(包括谷胱甘肽(GSH)和硫氧还蛋白)会对蛋白质进行去亚硝基化作用。因此,SNOs通常存储在质膜、囊泡、间质和亲脂性蛋白的折叠中,以保护它们免于被去亚硝基化,例如,介导凋亡的半胱天冬酶(caspases)就以SNO的形式存储在线粒体膜间空间中。
S-亚硝基化的过程是可逆。去亚硝基化是一种酶催化过程,它逆转了S-亚硝基化过程。然而,S-亚硝基化不是随机事件,且仅对特定的半胱氨酸残基进行S-亚硝基化。S-亚硝基化异常可能导致蛋白质发生错误折叠,突触损伤和细胞凋亡。SNO信号功能异常还与许多疾病的发病机制有关,例如阿尔茨海默氏心血管疾病。
由于蛋白质可能包含多个半胱氨酸,以及SNO的不稳定特性,S-亚硝基化的半胱氨酸可能很难检测到,且很难与非S-亚硝基化的氨基酸区分开。百泰派克生物科技建立了高度灵敏的分析平台,可以分析真核生物和原核生物中的S-亚硝基化半胱氨酸。此外,我们还优化了检测流程,可提供更快、更敏感的S-亚硝基化半胱氨酸分析服务。
S-亚硝基化分析服务工作一般流程
1. 在凝胶或溶液中水解蛋白质;
2. 使用抗S-亚硝基化半胱氨酸抗体进行S-亚硝基半胱氨酸富集;
3. HPLC分离后进行ESI-TOF MS/MS分析;
4. 质谱数据解析。
技术平台
离子色谱法
高效液相色谱(HPLC)
基质辅助激光解吸电离质谱(MALDI-MS)
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