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Far-Western Blot分析

价格：200元/1

所在地：北京市大兴区
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更新时间：2020-12-09

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Far-Western Blot是一种基于Western Blot技术的分子生物学方法，可用于检测体外蛋白质与蛋白质的相互作用，尤其是不需要目标蛋白质的天然结构的相互作用检测。

Far-Western Blot技术的整体工作流程与Western Blot相似，只是Western Blot中探测目标蛋白质需要抗体，而Far-Western Blot分析中不需要抗体，而是使用经过纯化和标记的“诱饵”蛋白来探测和检测膜上的目标蛋白。在Western Blot和Far-Western Blot中，蛋白质都是通过SDS凝胶和native PAGE凝胶对样品进行分离，然后将蛋白质从凝胶转移到膜上。转模后，用BSA进行封闭。在膜上对蛋白质进行变性和复性，及后续的检测步骤。Far-Western Blot技术用商业化的高度纯化的诱饵蛋白将膜标记上探针。在诱饵蛋白与目标蛋白反应后，根据所使用的诱饵蛋白，可以检测到与该目标蛋白相对应的条带。

为了鉴定与给定蛋白相互作用的蛋白，Far-Western Blot是一个实验成本低、灵敏度高的有效平台。远western blotting的原理是对western blotting的改进，以自然折叠的重组蛋白作为第一个探针，与转染到PVDF膜上的蛋白相互作用。Far-Western Blot使用的第二个探针是针对给定蛋白的特异性抗体，而酶标的第三个探针是针对第二个探针的抗体。当与LC-MS-MS蛋白鉴定相结合时，可以对得到的蛋白斑点(或蛋白条带)进行表征，然后进行进一步的功能分析，如蛋白免疫沉淀等。

Far-Western Blot分析时，当需要保留蛋白质的天然构象和天然相互作用时需要注意以下问题：1）变性条件下在SDS凝胶中分离的蛋白质可能会发生变性，而变性蛋白可能不会与诱饵蛋白发生反应，从而导致无法识别出相互作用。2）在结合之前将蛋白质变性并复性，也可能导致蛋白质发生构象变化，从而影响靶蛋白与诱饵蛋白的结合。3）如果结合位点受其它因素影响，失去与诱饵蛋白的结合能力，使诱饵蛋白无法与之反应，也可能导致相互作用检测失败。更棘手的是，以非天然构象呈现的蛋白质可能以新的非天然方式发生相互作用，导致检测假阳性。

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